酪蛋白磷酸肽含量（以干基計）檢測項目詳解

一、檢測意義

• 質量控制：確保產品符合標簽標示及法規要求。
• 工藝優化：指導生產過程中水解條件的調整。
• 功能驗證：CPP含量與生物活性直接相關，需精準定量。

二、檢測核心項目及方法

1. • 脫脂與干燥（干基制備）：
     • 液態樣品：冷凍干燥后粉碎過篩（60-80目）。
     • 固態樣品（如奶粉）：105℃烘干至恒重，計算水分含量。
   • 水解物提取：
     • 使用pH 4.6緩沖液沉淀未水解酪蛋白，離心取上清液（含CPP）。
     • 超濾（3 kDa膜）去除大分子雜質，收集濾液。
2. • 高效液相色譜法（HPLC）（推薦）：
     • 色譜條件：
       • 色譜柱：C18反相柱（250 mm × 4.6 mm, 5 μm）。
       • 流動相：乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液（梯度洗脫）。
       • 流速：1.0 mL/min，檢測波長：220 nm。
     • 標準曲線：以CPP標準品（純度≥95%）配制0.1-5.0 mg/mL系列濃度，進樣量10 μL。
   • 分光光度法（快速篩查）：
     • 基于CPP與鉬藍試劑的磷酸基團顯色反應，測定620 nm吸光度。
     • 需注意排除游離磷酸鹽的干擾。
3. • 線性范圍：R² ≥ 0.995。
   • 精密度：同一操作者重復檢測的RSD ≤ 5%。
   • 加標回收率：85%-115%（驗證準確性）。
   • 檢測限（LOD）與定量限（LOQ）：通常為0.05 mg/g和0.2 mg/g。

三、結果計算（以干基計）

1. 干基換算： \text{CPP含量（干基）} = \frac{\text{實測CPP濃度（mg/g）}}{1 - \text{水分含量（%）}} \times 100\%
2. 示例：
   • 若樣品水分含量為5%，實測CPP為45 mg/g，則干基含量為： 451−0.05=47.37 mg/g（干基）1−0.0545?=47.37mg/g（干基）

四、干擾因素與解決方案

• 共存物質：游離氨基酸、糖類可能干擾HPLC峰形，需優化梯度洗脫程序。
• 磷酸鹽污染：實驗器皿需嚴格酸浸泡清洗，避免背景干擾。
• 溫度敏感性：CPP易吸潮，樣品需密封保存于干燥器中。

五、標準依據

• GB 5009.XXX-20XX：食品安全國家標準中肽類物質測定通則。
• AOAC 999.12：國際認可的肽定量方法指南。

六、總結