一、檢測目的

1. 評估致敏風(fēng)險(xiǎn)：確定物質(zhì)是否具有引發(fā)皮膚免疫反應(yīng)的潛力。
2. 產(chǎn)品安全性驗(yàn)證：用于化妝品、藥品、工業(yè)化學(xué)品等的上市前安全性評估。
3. 替代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：推動(dòng)體外檢測技術(shù)的發(fā)展，減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用。

二、核心檢測項(xiàng)目與方法

1. 體內(nèi)試驗(yàn)（傳統(tǒng)動(dòng)物模型）

• • 原理：通過皮內(nèi)注射和局部涂抹受試物，評估致敏率。
  • 觀察指標(biāo)：皮膚紅斑、水腫等過敏反應(yīng)強(qiáng)度。
  • 適用性：歷史數(shù)據(jù)豐富，但倫理爭議較大。
• • 原理：通過測量小鼠耳后淋巴結(jié)細(xì)胞增殖程度判定致敏性。
  • 優(yōu)勢：減少動(dòng)物痛苦，定量化數(shù)據(jù)更精準(zhǔn)。

2. 體外替代試驗(yàn)（OECD認(rèn)可方法）

• • 檢測目標(biāo)：評估物質(zhì)與皮膚蛋白（半胱氨酸/賴氨酸肽）的結(jié)合能力。
  • 意義：致敏原需與皮膚蛋白結(jié)合形成完全抗原，此為致敏關(guān)鍵步驟。
• • 原理：利用人源THP-1單核細(xì)胞系，檢測CD86和CD54表面標(biāo)志物的表達(dá)上調(diào)。
  • 結(jié)果判定：標(biāo)志物表達(dá)量超過閾值即判定為致敏物。
• • 檢測機(jī)制：基于人角質(zhì)形成細(xì)胞系的基因報(bào)告系統(tǒng)，檢測抗氧化反應(yīng)元件（ARE）通路的激活。
  • 適用性：模擬皮膚細(xì)胞對致敏原的早期響應(yīng)。
• • 技術(shù)特點(diǎn)：使用重建的人源表皮模型，檢測炎癥因子（如IL-18）的釋放。
  • 優(yōu)勢：更接近人體真實(shí)反應(yīng)，適用于復(fù)雜混合物測試。

3. 計(jì)算機(jī)預(yù)測模型（QSAR）

• 原理：通過物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)預(yù)測致敏性，適用于早期研發(fā)篩選。
• 代表工具：Toxtree、DEREK等。

4. 臨床斑貼試驗(yàn)（人體試驗(yàn)）

• 適用階段：產(chǎn)品上市后或臨床試驗(yàn)階段。
• 方法：將受試物貼敷于志愿者背部皮膚，觀察48-72小時(shí)后的紅斑、丘疹等反應(yīng)。
• 倫理要求：需通過倫理審查，受試者知情同意。

三、檢測流程標(biāo)準(zhǔn)化

1. 受試物準(zhǔn)備：明確濃度、溶劑選擇及穩(wěn)定性測試。
2. 劑量選擇：依據(jù)預(yù)期暴露量設(shè)定梯度濃度。
3. 對照設(shè)置：陽性對照（如DNCB）、陰性對照（生理鹽水/溶劑）。
4. 結(jié)果判定：結(jié)合體外數(shù)據(jù)、劑量反應(yīng)關(guān)系及機(jī)制證據(jù)綜合評估。

四、國際法規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)

• OECD指南：如TG 429（LLNA）、TG 442C（DPRA）、TG 442D（h-CLAT）等。
• 歐盟法規(guī)：REACH法規(guī)、化妝品禁令（EC 1223/2009全面禁止動(dòng)物實(shí)驗(yàn)）。
• 中國標(biāo)準(zhǔn)：《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》明確替代方法優(yōu)先級。

五、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 化妝品：香精、防腐劑、染發(fā)劑等高風(fēng)險(xiǎn)成分篩查。
2. 藥品：外用制劑（膏藥、乳膏）的安全性評價(jià)。
3. 工業(yè)化學(xué)品：金屬、樹脂、染料等職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)評估。

六、挑戰(zhàn)與趨勢

• 組合策略（ITS）：聯(lián)合多項(xiàng)體外試驗(yàn)提高預(yù)測準(zhǔn)確性。
• 類器官與微流控技術(shù)：模擬復(fù)雜皮膚免疫微環(huán)境。
• 組學(xué)技術(shù)：通過蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)挖掘新型生物標(biāo)志物。

結(jié)語