一、致瀉大腸埃希氏菌的分類與致病型

1. 腸致病性大腸桿菌（EPEC）
   • 特征：攜帶 eae 基因（介導(dǎo)粘附）和 bfpA 基因（束狀菌毛）。
2. 腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ETEC）
   • 特征：表達 熱穩(wěn)定性毒素（ST） 和/或 熱不穩(wěn)定毒素（LT）。
3. 腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）
   • 特征：毒力基因與志賀氏菌相似（如 ipaH 基因）。
4. 腸出血性大腸桿菌（EHEC）
   • 特征：產(chǎn)生 志賀毒素（stx1/stx2），常見血清型O157:H7。
5. 腸集聚性大腸桿菌（EAEC）
   • 特征：攜帶 aggR 基因和生物膜形成能力。
6. 彌散黏附性大腸桿菌（DAEC）
   • 特征：通過 afa/dra 基因黏附腸上皮細胞。

二、核心檢測項目與流程

1. 初步分離與培養(yǎng)

• 樣品前處理：食品（如肉類、乳制品）需均質(zhì)后增菌，臨床樣本（糞便）直接接種。
• 選擇性培養(yǎng)基：
  • 山梨醇麥康凱瓊脂（SMAC）：用于篩選O157:H7（山梨醇不發(fā)酵）。
  • 顯色培養(yǎng)基（如ChromID™ EHEC）：特異性顯色區(qū)分DEC。
• 增菌培養(yǎng)：使用EC肉湯或改良胰蛋白胨大豆肉湯（mTSB）增菌18-24小時。

2. 生化鑒定

• IMViC試驗（吲哚、甲基紅、VP、檸檬酸鹽）：確認大腸埃希氏菌屬。
• β-葡萄糖醛酸酶檢測：O157:H7通常為陰性（區(qū)別于其他大腸桿菌）。

3. 血清學(xué)分型

• O抗原（菌體抗原）和H抗原（鞭毛抗原）檢測：
  • 使用特異性抗血清進行凝集試驗，如O157、O104、O26等高危血清型。

4. 毒力基因檢測（分子生物學(xué)方法）

• 多重PCR：同時檢測多種毒力基因（如 stx1/stx2、eae、lt/st、ipaH）。 示例引物組合：stx1-F: 5'-AGAATGCCCACTCCAGTA-3' stx1-R: 5'-GCGTCATCGTATACACAG-3' stx2-F: 5'-GGCACTGTCTGAAACTGCTC-3' stx2-R: 5'-TCGCCAGTTATCTGACATTCT-3'
• 實時熒光定量PCR（qPCR）：提高靈敏度，定量檢測毒素基因。
• 全基因組測序（WGS）：用于暴發(fā)溯源和耐藥基因分析。

5. 毒素檢測

• Vero細胞毒性試驗：檢測志賀毒素（Stx）對Vero細胞的殺傷作用。
• 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：商業(yè)化試劑盒（如Premier® EHEC）檢測Stx或LT/ST毒素。

6. 表型耐藥性檢測

• 藥敏試驗（Kirby-Bauer法或MIC測定）：針對常見抗生素（如β-內(nèi)酰胺類、氟喹諾酮類）評估耐藥性。

7. 快速檢測技術(shù)

• 免疫層析試紙條：15分鐘內(nèi)檢測O157:H7抗原或Stx毒素（如RapidChek® SELECT™）。
• 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）：無需復(fù)雜設(shè)備，適用于現(xiàn)場篩查。

三、檢測標(biāo)準(zhǔn)與法規(guī)

1. 國際標(biāo)準(zhǔn)
   • ISO/TS 13136:2012（食品中EHEC檢測方法）。
2. 中國標(biāo)準(zhǔn)
   • GB 4789.6-2016（食品微生物學(xué)檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗）。
   • WS/T 8-2021（臨床腹瀉樣本中DEC檢測指南）。

四、檢測難點與挑戰(zhàn)

1. 低濃度樣本：需通過增菌提高檢出率。
2. 血清型變異：非O157 EHEC（如O104:H4）易漏檢，需依賴分子檢測。
3. 混合感染：多重PCR或宏基因組測序可區(qū)分共存的致病型。
4. 假陽性/陰性：需結(jié)合表型與基因型結(jié)果交叉驗證。

五、應(yīng)用場景

1. 食品安全：肉類、生鮮蔬菜、飲用水中的DEC污染監(jiān)測。
2. 臨床診斷：急性腹瀉患者的病原體鑒定（尤其血便或溶血性尿毒綜合征患者）。
3. 疫情調(diào)查：食源性疾病暴發(fā)的溯源與傳播鏈分析。

六、未來發(fā)展方向

1. 微流控芯片技術(shù)：整合樣本處理、擴增和檢測于一體。
2. CRISPR-Cas系統(tǒng)：高特異性檢測毒力基因（如DETECTR技術(shù)）。
3. 人工智能輔助分析：基于WGS數(shù)據(jù)預(yù)測致病型和耐藥譜。

結(jié)語