一、菌種純度檢測(cè)

1. • 菌落觀察：在PDA培養(yǎng)基上，正常黑木耳菌絲呈白色絨毛狀，均勻致密；若出現(xiàn)顏色異常（綠、黃、灰等）或菌落形態(tài)差異，可能為霉菌或細(xì)菌污染。
   • 顯微鏡檢查：通過(guò)革蘭氏染色或乳酸酚棉藍(lán)染色，觀察是否存在酵母菌、放線菌等雜菌孢子或菌絲結(jié)構(gòu)。
2. • ITS序列分析：提取菌絲DNA，擴(kuò)增ITS（內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)）序列并與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，快速鑒定菌種是否混雜其他真菌。

二、菌種活力檢測(cè)

1. • 在25℃恒溫條件下，測(cè)量菌絲在PDA培養(yǎng)基上的日擴(kuò)展距離（mm/d），優(yōu)質(zhì)菌種日生長(zhǎng)量應(yīng)≥3.5mm。
2. • 使用氧電極法測(cè)定菌絲呼吸速率，高活力菌種耗氧量通常在0.8~1.2μmol O?/(g·min)范圍。
3. • 將菌種接種于液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)72小時(shí)后鏡檢，觀察菌絲斷片萌發(fā)率（應(yīng)≥95%）。

三、遺傳特性檢測(cè)

1. • SSR/ISSR標(biāo)記：通過(guò)多態(tài)性片段分析，建立菌株DNA指紋圖譜，比對(duì)不同代次菌種的一致性。
   • RAPD技術(shù)：隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA，快速篩查遺傳變異。
2. • 黑木耳為四極性異宗結(jié)合真菌，需通過(guò)PCR檢測(cè)待測(cè)菌株的A1A2/B1B2交配型基因，驗(yàn)證其遺傳信息是否完整。

四、農(nóng)藝性狀檢測(cè)

1. • 模擬栽培條件（濕度85%、溫度18~25℃），記錄菌袋現(xiàn)耳時(shí)間、耳片厚度及形態(tài)均勻度。優(yōu)質(zhì)菌種現(xiàn)耳周期≤35天，畸形耳率＜5%。
2. • 耐高溫性：32℃環(huán)境處理48小時(shí)，恢復(fù)培養(yǎng)后菌絲存活率需＞80%。
   • 抗雜菌能力：接種常見競(jìng)爭(zhēng)雜菌（如木霉），觀察抑制圈直徑是否≥2cm。

五、安全性檢測(cè)

1. • 采用ICP-MS法檢測(cè)菌絲中鉛、鎘、砷、汞含量，需符合《GB 2762-2022 食品中污染物限量》要求。
2. • 針對(duì)菌種生產(chǎn)過(guò)程中可能使用的殺菌劑（如多菌靈），通過(guò)HPLC-MS/MS檢測(cè)，殘留限量需低于0.01mg/kg。
3. • 依據(jù)《GB 4789系列標(biāo)準(zhǔn)》，檢測(cè)沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等致病菌，結(jié)果應(yīng)為陰性。

六、菌種保存穩(wěn)定性檢測(cè)

1. • 連續(xù)轉(zhuǎn)接5代后，檢測(cè)菌絲生長(zhǎng)速率及出耳性狀，退化率應(yīng)＜10%。
2. • 4℃下保存6個(gè)月，復(fù)蘇后菌絲活力需保持初始值的90%以上。

七、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范

• 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：《GB 19171-2003 黑木耳菌種》
• 行業(yè)規(guī)程：《NY/T 1098-2018 食用菌菌種真實(shí)性鑒定 SSR分子標(biāo)記法》

結(jié)語(yǔ)