熱原檢查法的檢測項目詳解

一、主要檢測方法

1. • 原理：通過注射樣品至家兔體內，監測體溫變化判定熱原存在。
   • 適用性：適用于無法用BET檢測的樣品（如某些渾濁或高黏度制劑）。
   • 檢測項目：
     • 體溫監測：注射后3小時內每30分鐘記錄體溫。
     • 判定標準（如中國藥典）：
       • 單只家兔升溫≤0.5℃且總升溫≤1.3℃為合格；
       • 單只升溫≥0.6℃或總升溫≥3.5℃為不合格。
2. • 原理：利用鱟血變形細胞裂解物與內毒素的凝膠化反應。
   • 適用性：快速、靈敏，廣泛應用于注射劑、生物制品等。
   • 檢測項目：
     • 凝膠法：觀察是否形成凝膠判定結果（定性或半定量）。
     • 光度法：通過吸光度變化定量內毒素濃度。
     • 限值計算：根據公式 ?=?/?L=K/M，其中 ?K 為人用劑量閾值（5 EU/kg），?M 為最大給藥劑量。

二、核心檢測項目與流程

1. • 溶解/浸提：針對器械類樣品，需用無熱原水或特定溶劑浸提。
   • 稀釋：調整濃度至BET檢測范圍內（通常0.125-0.5 EU/mL）。
2. • 驗證條件：確認樣品不抑制或增強鱟試劑反應（需通過添加標準內毒素驗證）。
   • 調整措施：通過稀釋、調節pH或過濾消除干擾。
3. • 陰性對照：無熱原水或溶劑，確認試劑無污染。
   • 陽性對照：加入已知濃度內毒素，確保試劑靈敏度。
4. • BET合格標準：樣品中內毒素含量低于規定限值（如注射用水≤0.25 EU/mL）。
   • 復測規則：初試不合格時，需進行復測或家兔法確認。

三、不同產品的檢測要求

四、方法學驗證與合規要求

1. • 靈敏度（λ）：確認鱟試劑標示靈敏度（如0.03 EU/mL）符合要求。
   • 重復性：同一樣品多次檢測結果一致。
   • 回收率：添加內毒素的回收率應在50%-200%。
2. • 藥典差異：USP要求家兔法至少3只，而EP可能允許2只復測；BET限值需符合各區域標準。

五、新興技術與替代方法

• 重組C因子法：無需鱟血，避免資源依賴，逐步被EP和USP收錄。
• 體外熱原測試：基于單核細胞激活的細胞因子檢測（如IL-6），適用于復雜樣品。

六、常見問題與解決方案

• 假陽性：避免環境或操作污染，使用無熱原耗材。
• 假陰性：檢查鱟試劑活性，確認未超過有效期。

七、總結