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超氧化物歧化酶檢測

發(fā)布時(shí)間：2025-05-16 19:53:01- 點(diǎn)擊數(shù)： - 關(guān)鍵詞：

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- 總SOD活性：評(píng)估樣本中所有SOD同工酶（Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、EC-SOD）的總抗氧化能力。
- 同工酶特異性檢測：區(qū)分不同類型SOD的活性（如線粒體Mn-SOD與胞質(zhì)Cu/Zn-SOD）。
- 檢測原理：通過抑制超氧陰離子介導(dǎo)的化學(xué)反應(yīng)（如氮藍(lán)四唑/黃嘌呤氧化酶法）間接測定SOD活性。
- 采用免疫學(xué)方法（如ELISA、Western blot）定量特定SOD同工酶的表達(dá)水平，適用于研究基因表達(dá)或病理狀態(tài)下的蛋白變化。
- 通過RT-qPCR或基因測序檢測SOD基因（如SOD1、SOD2、SOD3）的mRNA表達(dá)量，用于分子機(jī)制研究。

- 原理：基于SOD抑制超氧陰離子與顯色底物（如氮藍(lán)四唑，NBT）的還原反應(yīng)，通過吸光度變化計(jì)算酶活性。
- 步驟：
  1. 樣本（血清、組織勻漿等）與黃嘌呤氧化酶、底物反應(yīng)生成O??。
  2. O??還原NBT生成紫色甲臜，測560 nm吸光度。
  3. SOD抑制甲臜生成，抑制率與酶活性正相關(guān)。
- 優(yōu)點(diǎn)：成本低、操作簡便。
- 缺點(diǎn)：易受其他抗氧化物質(zhì)干擾。
- 原理：利用魯米諾等發(fā)光試劑與O??反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，SOD通過清除O??降低發(fā)光強(qiáng)度。
- 優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、動(dòng)態(tài)范圍廣。
- 應(yīng)用：適用于微量樣本（如細(xì)胞培養(yǎng)液）。
- 原理：采用特異性抗體捕獲SOD蛋白，通過酶標(biāo)二抗顯色定量。
- 優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，可區(qū)分同工酶。
- 局限性：僅檢測蛋白含量，無法直接反映酶活性。
- 原理：基于SOD對(duì)超氧陰離子電化學(xué)信號(hào)的調(diào)控，利用修飾電極檢測電流變化。
- 優(yōu)勢：快速、適合實(shí)時(shí)監(jiān)測。

- 診斷：SOD活性降低常見于糖尿病、阿爾茨海默病、慢性腎病等慢性疾病。
- 療效監(jiān)測：抗氧化治療（如NAC、維生素E）后SOD水平回升提示治療有效。
- 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、敗血癥患者的SOD活性異常，與炎癥因子（IL-6、TNF-α）呈負(fù)相關(guān)。
- 腫瘤細(xì)胞中Mn-SOD表達(dá)下調(diào)可能與轉(zhuǎn)移相關(guān)，檢測SOD2基因突變有助于預(yù)后評(píng)估。
- 衰老個(gè)體SOD活性普遍下降；動(dòng)脈粥樣硬化患者EC-SOD含量降低。

- 血液：分離血清/血漿，避免溶血（紅細(xì)胞含高濃度Cu/Zn-SOD）。
- 組織：快速液氮冷凍，防止酶降解。
- 細(xì)胞：裂解后離心取上清液，避免反復(fù)凍融。
- 避免使用EDTA抗凝劑（可能螯合Cu²?/Zn²?，影響Cu/Zn-SOD活性）。
- 檢測前需排除樣本中過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）的交叉影響。

- 血清總SOD活性：通常為80-220 U/mL（方法依賴性，需參照試劑盒標(biāo)準(zhǔn)）。
- SOD1（Cu/Zn-SOD）：占總活性的60-80%；SOD2（Mn-SOD）占20-30%。
- 活性升高：急性氧化應(yīng)激代償反應(yīng)、某些腫瘤（如肝癌）。
- 活性降低：慢性疾病、遺傳性SOD缺陷（如肌萎縮側(cè)索硬化癥與SOD1突變相關(guān)）。