一、分子特征檢測（基因水平）
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- 目標基因：檢測Bt殺蟲基因（如Cry1Ab、Cry1Ac）是否存在。
- 篩選標記基因：如抗生素標記基因（hpt、nptII）或除草劑抗性基因（bar）。
- 調控元件：驗證啟動子（如CaMV 35S）、終止子（如NOS）的完整性。
- 方法：PCR定性檢測、Southern雜交（確定基因插入位點與拷貝數）。
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- 通過多代遺傳分析（如Southern雜交或qPCR）確認轉基因的遺傳穩定性。
二、蛋白表達檢測（功能驗證）
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- 使用ELISA或Western Blot定量檢測Bt蛋白（如Cry1Ab/Ac）在不同組織（葉、莖、籽粒）中的表達水平。
- 質譜分析（LC-MS/MS）驗證蛋白結構與預期一致。
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- 離體生物測定：用敏感昆蟲（如稻縱卷葉螟幼蟲）飼喂水稻組織，觀察死亡率與生長抑制率。
- 活體試驗：田間監測靶標害蟲的種群變化。
三、環境安全評估
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- 評估Bt蛋白對蜜蜂、寄生蜂、土壤微生物等非靶標生物的影響。
- 實驗室模擬實驗結合田間長期監測。
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- 檢測Bt基因通過花粉向野生稻或近緣種的傳播概率（如PCR檢測鄰近植株的基因流）。
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- 監控靶標害蟲對Bt蛋白的抗性演化，制定抗性治理策略（如庇護所策略）。
四、食品安全性檢測
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- 急性毒性試驗（大鼠灌胃實驗）、亞慢性毒性試驗（90天喂養實驗）。
- 致敏性預測（與已知過敏原序列比對分析）。
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- 對比轉與非轉基因水稻的蛋白質、脂肪、維生素、礦物質等含量差異。
- 檢測潛在代謝物變化（如植酸、抗營養因子）。
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- 評估標記基因是否可能轉移至腸道微生物或環境微生物。
五、檢測標準與法規
- 中國標準：農業農村部《轉基因植物及其產品成分檢測》（如NY/T 672系列）。
- 國際參考：ISO 21569/21571（分子檢測）、OECD轉基因作物安全評估指南。
- 閾值管理：各國對轉基因成分標識閾值（如歐盟0.9%、中國0%強制標識）。
六、技術發展趨勢
- 高通量測序：全基因組重測序檢測非預期插入或基因組變異。
- CRISPR檢測：區分傳統轉基因與基因編輯技術產物。
- 數字化PCR：精確量化低濃度轉基因成分。
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