動物皮內反應試驗檢測：核心檢測項目解析

一、檢測目的

1. 評估局部刺激性：檢測受試物是否引起紅斑、水腫、硬結等急性或慢性皮膚炎癥反應。
2. 預測致敏性：識別可能引發過敏反應的物質（如某些藥物或化妝品成分）。
3. 安全性驗證：確保醫療器械（如植入材料）或藥品注射劑不會對組織造成不可逆損傷。

二、常用動物模型

• 實驗動物：通常選用新西蘭白兔、豚鼠或小型豬，因其皮膚結構與人類相似。
• 注射部位：背部或側腹部剃毛區域，避免損傷深層組織。

三、核心檢測項目詳解

1. 局部組織反應

• • 檢測方法：肉眼或皮膚鏡觀察注射部位顏色變化。
  • 評分標準（0-4分）：
    • 0分：無紅斑；
    • 1分：輕微紅斑（需仔細辨認）；
    • 2分：明顯紅斑；
    • 3分：中度紅斑伴擴散；
    • 4分：嚴重紅斑或紫紺。
• • 檢測方法：觸診或測量皮膚厚度。
  • 評分標準（0-4分）：
    • 0分：無腫脹；
    • 1分：輕微腫脹（邊緣略高）；
    • 4分：嚴重腫脹伴皮膚緊繃。
• • 評判標準：記錄組織壞死面積（mm²）及深度（表皮、真皮或皮下層損傷）。

2. 全身性反應

• • 檢測方法：分階段注射受試物（誘導期和激發期），觀察是否出現全身性紅斑、呼吸困難或休克。
  • 結果判定：陽性反應提示物質具有致敏性。
•  

3. 組織病理學檢查

• 取樣時間：通常在試驗結束后24小時至7天內取注射部位皮膚組織。
• 檢測內容：
  • 炎癥細胞浸潤（中性粒細胞、淋巴細胞數量）；
  • 膠原纖維變性或斷裂；
  • 血管擴張或出血；
  • 表皮層脫落或真皮壞死。
• 染色技術：HE染色（常規組織學）、Masson染色（膠原分析）等。

4. 生化指標分析

• 炎癥介質檢測：如IL-6、TNF-α等細胞因子水平，定量評估炎癥程度。
• 氧化應激指標：SOD活性、MDA含量等，反映自由基損傷。

四、試驗實施步驟

1. 預處理：動物適應性飼養7天，注射部位剃毛清潔。
2. 皮內注射：使用26-30G針頭將受試物（0.1-0.2 mL）注入真皮層，對照組注射生理鹽水。
3. 觀察記錄：
   • 短期觀察：注射后1、24、48、72小時記錄局部反應；
   • 長期觀察：持續監測7-14天，評估遲發性反應。
4. 組織取樣與檢測：處死動物后取皮膚樣本進行病理學分析。

五、結果分析與評判

• 刺激指數計算：紅斑與水腫評分總和（按OECD 404標準，總分≤1為無刺激，≥5為嚴重刺激）。
• 致敏性分級：根據豚鼠試驗中陽性反應比例分為弱致敏、中度致敏或強致敏。
• 安全閾值確定：結合組織病理學結果，判斷受試物是否可安全接觸人體組織。

六、應用領域

1. 藥物開發：注射劑、疫苗的局部耐受性評估。
2. 醫療器械：植入材料（如縫合線、導管）的生物相容性測試。
3. 化妝品與化學品：原料及成品的皮膚刺激性篩查（符合ISO 10993-10標準）。
4. 工業毒理學：新化學物質注冊的法規符合性檢測（如REACH法規）。

七、倫理與替代方法

• 3R原則：減少（Reduction）、優化（Refinement）、替代（Replacement）。
• 體外替代技術：
  • 人工皮膚模型（EpiDerm™、SkinEthic™）；
  • 細胞毒性測試（如中性紅攝取試驗）；
  • 計算機預測模型（QSAR）。

八、