非洲馬瘟（African Horse Sickness, AHS）是由非洲馬瘟病毒引起的一種高致死性蟲(chóng)媒傳染病，主要感染馬、騾、驢等馬科動(dòng)物，通過(guò)庫(kù)蠓等吸血昆蟲(chóng)傳播。該病被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）列為必須通報(bào)的疫病，對(duì)馬產(chǎn)業(yè)和國(guó)際貿(mào)易具有重大威脅。非洲馬瘟的臨床表現(xiàn)包括高熱、皮下水腫、呼吸困難及內(nèi)臟出血等，死亡率可達(dá)50%-95%。近年來(lái)，隨著氣候變化和跨境動(dòng)物流動(dòng)增加，非疫區(qū)國(guó)家面臨輸入性風(fēng)險(xiǎn)顯著上升。快速、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是防控該病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，也是疫區(qū)凈化、疫苗效果評(píng)估及國(guó)際貿(mào)易檢疫的核心依據(jù)。

非洲馬瘟檢測(cè)的主要項(xiàng)目與技術(shù)

針對(duì)非洲馬瘟的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)需遵循WOAH《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)》標(biāo)準(zhǔn)，主要分為病原學(xué)檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)兩大體系，結(jié)合臨床癥狀與流行病學(xué)調(diào)查進(jìn)行綜合判斷。

1. 病原學(xué)檢測(cè)

（1）病毒分離培養(yǎng)：采集發(fā)熱期動(dòng)物的抗凝血、脾臟或肺組織樣本，接種于Vero、BHK-21等敏感細(xì)胞系或通過(guò)腦內(nèi)接種乳鼠進(jìn)行病毒增殖。該方法雖為"金標(biāo)準(zhǔn)"，但需在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室操作，耗時(shí)約7-14天。

（2）RT-PCR檢測(cè)：針對(duì)病毒基因組節(jié)段7（VP7基因）設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR可在4小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，最低檢出限達(dá)10個(gè)病毒拷貝/μL。最新開(kāi)發(fā)的multiplex RT-PCR可同步鑒別不同血清型。

（3）電子顯微鏡觀察：采用負(fù)染技術(shù)直接觀察病毒顆粒的二十面體結(jié)構(gòu)（直徑約70nm），適用于急性期樣本的快速初篩。

2. 血清學(xué)檢測(cè)

（1）ELISA試驗(yàn)：包括間接ELISA和競(jìng)爭(zhēng)ELISA兩種形式，檢測(cè)血清中的特異性IgG抗體。歐盟認(rèn)證的ID Screen? AHS Competition ELISA試劑盒特異性達(dá)99.8%，適用于大規(guī)模篩查。

（2）病毒中和試驗(yàn)（VNT）：使用活病毒或假病毒系統(tǒng)檢測(cè)中和抗體效價(jià)，能區(qū)分疫苗免疫抗體與野毒感染抗體。需在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室操作，試驗(yàn)周期5-7天。

（3）免疫熒光試驗(yàn)（IFA）：通過(guò)感染細(xì)胞爬片與待檢血清反應(yīng)，觀察特異性熒光信號(hào)。快速診斷卡（LFD）可在田間15分鐘內(nèi)獲得初步結(jié)果。

3. 基因分型與進(jìn)化分析

針對(duì)病毒基因組高變區(qū)（VP2基因）進(jìn)行全基因測(cè)序，結(jié)合生物信息學(xué)工具構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，可追溯疫情來(lái)源、監(jiān)測(cè)病毒變異。納米孔測(cè)序技術(shù)（MinION）已實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)測(cè)序分析。

樣本采集與運(yùn)輸規(guī)范

急性期優(yōu)先采集EDTA抗凝血（4mL）和脾臟組織，恢復(fù)期采集血清樣本。運(yùn)輸需使用三重包裝系統(tǒng)，保持4℃冷鏈（病毒分離樣本需-80℃冷凍）。跨境送檢須遵守《國(guó)際危險(xiǎn)品運(yùn)輸規(guī)則》UN3373標(biāo)準(zhǔn)。

當(dāng)前非洲馬瘟檢測(cè)技術(shù)正向自動(dòng)化、數(shù)字化方向發(fā)展，如微流控芯片整合核酸提取與檢測(cè)全流程，人工智能輔助的病理圖像分析系統(tǒng)等。檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室需定期參加WOAH組織的國(guó)際能力驗(yàn)證，確保檢測(cè)結(jié)果的互認(rèn)。在非疫區(qū)國(guó)家，建議對(duì)進(jìn)口馬匹實(shí)施21天隔離期，并采用"雙試劑平行檢測(cè)"策略以降低漏檢風(fēng)險(xiǎn)。