一、弧菌檢測的核心意義

1. 食品安全控制：預防海產品中副溶血弧菌等引發的食源性疾病。
2. 水源衛生監測：評估飲用水、海水浴場等環境的安全性。
3. 臨床診斷：快速識別感染源以指導治療。

二、關鍵檢測項目及方法

1. 常規培養計數法

• 原理：利用選擇性培養基分離培養弧菌，通過菌落計數推算樣本中活菌數。
• 常用培養基：
  • TCBS瓊脂（硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖瓊脂）：選擇性培養霍亂弧菌（黃色菌落）和副溶血弧菌（藍綠色菌落）。
  • 堿性蛋白胨水：用于增菌培養。
• 步驟：
  1. 樣本梯度稀釋后涂布于TCBS平板。
  2. 35-37℃培養18-24小時。
  3. 根據菌落形態、顏色及生化試驗（氧化酶試驗、賴氨酸脫羧酶試驗等）鑒定。
• 優點：成本低、特異性高。
• 缺點：耗時長（需48小時以上），無法檢測不可培養狀態的弧菌。

2. 分子生物學檢測

• 實時熒光定量PCR（qPCR）：
  • 靶基因：如霍亂弧菌的ctxA基因、副溶血弧菌的tdh/trh基因。
  • 特點：4-6小時內完成，靈敏度達1-10 CFU/mL，可區分致病性弧菌與非致病株。
• 多重PCR：同時檢測多種弧菌（如霍亂弧菌、副溶血弧菌、創傷弧菌）。
• 宏基因組測序：用于環境樣本中弧菌群落的多樣性分析。

3. 免疫學檢測

• 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）：
  • 檢測弧菌特異性抗原（如霍亂弧菌脂多糖）或毒素（如霍亂毒素）。
• 膠體金試紙條：
  • 基于抗原-抗體反應，15分鐘內快速定性檢測，適用于現場篩查。

4. 快速檢測技術

• 流式細胞術：
  • 結合熒光標記抗體，實現弧菌的快速計數與分選。
• 生物傳感器：
  • 利用納米材料或光纖技術，通過光學/電信號變化檢測弧菌，靈敏度高。

5. 活菌計數與代謝活性檢測

• ATP生物發光法：
  • 檢測細菌ATP含量，間接反映活菌數量，30分鐘內出結果。
• 流式細胞儀結合熒光染料：區分活菌/死菌。

三、檢測項目的選擇依據

四、質量控制與標準化

1. 陽性對照：使用標準菌株（如ATCC 14035霍亂弧菌）驗證檢測體系。
2. 陰性對照：排除交叉污染。
3. 國際標準：
   • ISO/TS 21872-1:2017（食品中致病性弧菌檢測）。
   • FDA《細菌學分析手冊》第9章（海產品中弧菌檢測）。

五、未來趨勢

1. 微流控芯片技術：整合樣本前處理、擴增與檢測，實現“樣本進-結果出”。
2. CRISPR-Cas檢測：基于特異性基因編輯酶的分子診斷，靈敏度達單拷貝級別。
3. 人工智能輔助圖像識別：自動判讀培養平板菌落與藥敏試驗結果。

六、結語