引言

一、檢測項目分類

1. 初步篩選：通過培養基特征或快速試紙法判斷是否存在目標菌。
2. 確認鑒定：結合生化試驗、分子生物學或免疫學方法確認菌種。
3. 毒力基因分析：評估菌株致病性（如毒素基因檢測）。
4. 藥敏試驗：指導臨床抗生素使用（針對耐藥菌株）。

二、各致病菌的檢測方法

1. 大腸桿菌（Escherichia coli）

• 常規檢測：
  • 選擇性培養基：麥康凱瓊脂（MAC）或伊紅美藍瓊脂（EMB），菌落呈金屬光澤。
  • 生化試驗：吲哚試驗、MR-VP試驗、β-葡萄糖醛酸酶（GUD）檢測。
• 毒力檢測：
  • PCR檢測：腸毒素基因（如stx1、stx2）、致病型（如ETEC、EHEC）特異性基因。
  • 免疫學方法：ELISA檢測志賀毒素（Shiga toxin）。
• 快速檢測： 免疫層析試紙（如乳膠凝集法）、熒光定量PCR（qPCR）。

2. 沙門菌（Salmonella spp.）

• 分離培養：
  • 富集培養：緩沖蛋白胨水（BPW）增菌，后接種于XLD瓊脂或SS瓊脂。
  • 典型菌落：透明或黑色中心（含硫化氫）。
• 生化鑒定： 三糖鐵（TSI）試驗（斜面紅/底層黃，產H?S）、賴氨酸脫羧酶試驗。
• 血清學分型： 多價O抗原和H抗原凝集試驗。
• 分子檢測： invA基因（沙門菌特異靶點）PCR檢測。

3. 乙型溶血鏈球菌（β-hemolytic Streptococcus）

• 溶血特征： 血瓊脂平板上完全溶血（β溶血環）。
• 分型鑒定：
  • 蘭斯菲爾德分群：乳膠凝集試驗檢測A群（如化膿鏈球菌）、B群（無乳鏈球菌）。
  • 桿菌肽敏感性：A群鏈球菌敏感（0.04 U桿菌肽紙片）。
• 分子檢測： emm基因分型或16S rRNA測序。

4. 銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）

• 選擇性培養基： 十六烷基三甲基溴化銨（Cetrimide）瓊脂，菌落呈藍綠色（色素擴散）。
• 生化特征： 氧化酶陽性、42℃生長試驗陽性。
• 毒力因子檢測： 彈性蛋白酶（lasB基因）、綠膿菌素（pyocyanin）的PCR或HPLC分析。
• 快速檢測： 環介導等溫擴增（LAMP）技術。

5. 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）

• 分離培養： Baird-Parker瓊脂（黑色菌落伴渾濁環）或甘露醇鹽瓊脂（黃色菌落）。
• 凝固酶試驗： 玻片法（結合血漿凝固）或試管法（金黃色葡萄球菌陽性）。
• 毒素檢測：
  • 腸毒素：ELISA或免疫磁珠法檢測SEA-SEE。
  • PVL毒素：PCR檢測lukS/F-PV基因（與嚴重感染相關）。
• 耐藥性檢測： MRSA（甲氧西林耐藥菌）檢測（mecA/C基因或頭孢西丁紙片法）。

三、檢測方法比較

四、應用領域

1. 食品安全：檢測食品（肉類、乳制品）中的沙門菌、金黃色葡萄球菌。
2. 臨床診斷：血/痰標本中乙型溶血鏈球菌、銅綠假單胞菌的分離與藥敏分析。
3. 水質監測：水中大腸桿菌作為糞便污染的指示菌。
4. 院內感染控制：環境表面銅綠假單胞菌的溯源檢測。

五、檢測標準與質量控制

• 國際標準： ISO 6579（沙門菌）、ISO 16649（大腸桿菌）、CLSI藥敏指南。
• 質控要點： 陽性對照菌株（如ATCC標準菌株）、避免交叉污染、定期校準設備。

六、未來發展趨勢

• 自動化檢測：全自動微生物鑒定系統（如VITEK 2）。
• 納米技術：基于納米材料的生物傳感器提升靈敏度。
• 宏基因組測序：直接分析復雜樣本中的微生物群落。