一、樣本采集與處理

1. • 最佳時機：瘧疾發熱期（寒戰發作后6-8小時），此時外周血中瘧原蟲密度最高。
   • 亞種差異：惡性瘧原蟲在外周血中僅見環狀體和配子體，需結合臨床判斷。
2. • 末梢血：耳垂或指尖穿刺采集，快速制備血膜。
   • 靜脈血：EDTA抗凝管采集，2小時內完成制片，避免蟲體變形。
3. • 避免使用肝素抗凝（可能抑制染色）。
   • 樣本需標記患者信息及采血時間，室溫保存不超過48小時。

二、血膜制備與染色

（一）厚薄血膜制備

（二）染色方法

1. • 優點：細胞核（紫紅色）與細胞質（藍色）對比清晰，蟲種鑒別更準確。
   • 步驟：血膜甲醇固定后，用10%吉姆薩染液染色15-30分鐘，pH 7.2緩沖液沖洗。
2. • 快速法：無需預先固定，染色時間短（5-10分鐘），適用于急診篩查。
   • 局限性：細胞結構著色較淺，需經驗判斷。
3. • 染色液需定期過濾，避免沉淀干擾。
   • 染色后血膜應呈淡紫色，若偏紅（pH過低）或偏藍（pH過高）需調整緩沖液。

三、顯微鏡檢查要點

（一）鏡檢流程

1. 低倍鏡（10×）初篩：厚血膜掃描可疑區域（蟲體呈藍點狀）。
2. 油鏡（100×）確認：觀察薄血膜中紅細胞內蟲體形態。
3. 計數規則：至少檢查200個厚血膜視野或1000個紅細胞（薄血膜）。

（二）瘧原蟲形態學鑒別

四、結果判讀與報告規范

1. • 厚血膜：發現≥1個明確瘧原蟲。
   • 薄血膜：紅細胞內典型蟲體結構（需排除染色雜質干擾）。
2. • 明確標注瘧原蟲種類（如：惡性瘧原蟲、間日瘧原蟲）。
   • 混合感染需注明各蟲種比例。
3. • 臨床高度懷疑瘧疾時，需連續3天復查血片。
   • 備注采樣時間與患者發熱史，避免假陰性。

五、質量控制與誤差分析

1. • 假陰性：采血時機不當、血膜過厚、染色過度脫色。
   • 假陽性：血小板或染料沉淀誤判為環狀體。
2. • 雙人復核陽性樣本，疑難樣本需上級實驗室確認。
   • 定期參加WHO瘧疾鏡檢能力測試（如EQA計劃）。

六、鏡檢技術的局限性與發展

1. • 低原蟲血癥（<100個/μl）易漏診，需結合快速抗原檢測或PCR。
   • 依賴人員經驗，培訓周期長（≥6個月）。
2. • AI輔助圖像識別系統：靈敏度達98%，可縮短診斷時間。
   • 數字顯微鏡遠程會診：適用于基層醫療機構。

結語