抑菌效力檢查：檢測項(xiàng)目與方法詳解

一、檢測項(xiàng)目分類與原理

1. • 目的：模擬產(chǎn)品被微生物污染后，測定防腐劑對(duì)微生物的殺滅或抑制作用。
   • 關(guān)鍵步驟：
     • 接種微生物：選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株（如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉等），按一定濃度（通常為 105∼106 CFU/mL105∼106CFU/mL）添加到待測樣品中。
     • 時(shí)間點(diǎn)檢測：在預(yù)設(shè)時(shí)間（如0、7、14、28天）取樣，通過平皿計(jì)數(shù)法或膜過濾法檢測存活微生物數(shù)量。
     • 結(jié)果判定：計(jì)算菌落數(shù)下降對(duì)數(shù)值（Log值），如細(xì)菌需下降≥3 Log（7天）、真菌≥1 Log（14天），且28天內(nèi)持續(xù)抑制。
2. • 目標(biāo)菌種：根據(jù)不同產(chǎn)品類型選擇特定致病菌，如：
     • 滴眼液：銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌。
     • 注射劑：需無菌要求，通常不適用抑菌效力測試（除非含防腐劑）。
   • 方法：采用選擇性培養(yǎng)基或分子生物學(xué)技術(shù)（如PCR）檢測是否含有限定微生物。
3. • 檢測手段：高效液相色譜（HPLC）、氣相色譜（GC）等定量分析防腐劑實(shí)際濃度，確保其在有效范圍內(nèi)。

二、檢測方法選擇

1. 平皿計(jì)數(shù)法：適用于非抑菌性基質(zhì)（如乳膏），直接涂布計(jì)數(shù)。
2. 膜過濾法：針對(duì)液體樣品，通過過濾去除防腐劑后培養(yǎng)殘留微生物。
3. 最大可能數(shù)法（MPN）：用于低微生物負(fù)荷樣品的概率統(tǒng)計(jì)。

三、影響因素與關(guān)鍵控制點(diǎn)

1. 產(chǎn)品理化性質(zhì)：pH、粘度、乳化狀態(tài)可能影響防腐劑活性。
2. 微生物種類：細(xì)菌芽孢、真菌孢子耐受力強(qiáng)，需延長觀察周期。
3. 接種均一性：確保微生物在樣品中分散均勻，避免局部失活。
4. 中和劑選擇：在培養(yǎng)前需中和防腐劑，防止假陰性結(jié)果（如使用卵磷脂、吐溫80）。

四、國際標(biāo)準(zhǔn)與評(píng)價(jià)依據(jù)

• USP ⟨51⟩：要求細(xì)菌在14天內(nèi)下降3 Log，28天不反彈；酵母/霉菌14天內(nèi)不增殖。
• EP 5.1.3：分類為“A（強(qiáng)效）”至“D（無效）”，根據(jù)Log下降值分級(jí)。
• ChP 1121：與USP類似，強(qiáng)調(diào)28天的持續(xù)抑菌能力。

• 細(xì)菌：14天下降≥2 Log，28天≥3 Log。
• 真菌：28天菌落數(shù)≤初始值。

五、應(yīng)用場景與案例分析

1. 多劑量注射劑：含苯酚或間甲酚的產(chǎn)品需通過挑戰(zhàn)試驗(yàn)證明有效期內(nèi)的抑菌能力。
2. 外用制劑（乳膏/凝膠）：易滋生真菌，需額外檢測黑曲霉的抑制效果。
3. 滴眼液：重點(diǎn)關(guān)注銅綠假單胞菌（常見污染源）的殺滅速度。

六、