阪歧腸桿菌檢測項目詳解

一、阪歧腸桿菌簡介

二、檢測目的

1. 食品安全保障：預防阪歧腸桿菌污染嬰幼兒配方奶粉、乳制品等高風險食品。
2. 公共衛生防控：降低新生兒和免疫力低下人群的感染風險。
3. 生產環境監控：追蹤食品加工設備、生產環境的污染源。

三、核心檢測項目

1. 樣本類型

• 食品類：奶粉（特別是嬰幼兒配方奶粉）、乳制品、淀粉類食品、干燥食品等。
• 環境樣本：生產設備表面、水源、空氣塵埃等。
• 臨床樣本：新生兒糞便、血液、腦脊液（需結合臨床診斷）。

2. 檢測流程

(1) 樣本前處理

• 食品樣本：無菌稱取25g樣品，加入225mL增菌液（如緩沖蛋白胨水或改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-mLST）。
• 環境樣本：采樣拭子浸泡于增菌液中震蕩洗脫。

(2) 選擇性增菌

• 使用阪歧腸桿菌專用增菌液（如EE肉湯），36±1℃培養18-24小時，增強目標菌濃度。

(3) 分離培養

• 接種至選擇性瓊脂平板（如DFI瓊脂、VRBG瓊脂），37℃培養24-48小時。
• 典型菌落特征：DFI平板上呈藍綠色菌落，周圍有黃色暈環。

(4) 生化鑒定

• 關鍵生化試驗：
  • 氧化酶試驗（陰性）
  • 葡萄糖發酵（產酸產氣）
  • α-葡萄糖苷酶活性（陽性，阪歧腸桿菌特異性標志）
  • 檸檬酸鹽利用（陽性）
  • 賴氨酸脫羧酶（陰性）

(5) 分子生物學檢測

• PCR檢測：針對阪歧腸桿菌特有基因（如gluA、ompA、ITS序列）進行擴增，確認種屬。
• 實時熒光定量PCR（qPCR）：快速定量檢測，適用于高通量篩查。
• 全基因組測序（WGS）：用于溯源分析和耐藥性研究。

(6) 血清學分型

• 通過O抗原和H抗原分型，確定菌株的血清型（如O1、O2等），輔助流行病學調查。

3. 快速檢測技術

• 免疫層析試紙條：基于抗原抗體反應，適用于現場篩查。
• MALDI-TOF質譜：通過蛋白質指紋圖譜快速鑒定菌種。

四、檢測標準與限值

1. 國際標準：
   • ISO 22964:2017：食品和飼料中阪歧腸桿菌檢測方法。
   • FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM)：美國食品藥品監督管理局推薦方法。
2. 中國標準：
   • GB 4789.40-2016：食品安全國家標準 阪歧腸桿菌檢驗。
3. 限值要求：
   • 嬰幼兒配方奶粉中不得檢出阪歧腸桿菌（0 CFU/100g）。

五、注意事項

1. 避免交叉污染：檢測過程需嚴格無菌操作，防止環境或試劑污染。
2. 假陽性/假陰性控制：使用內參基因驗證PCR結果，結合生化試驗綜合判斷。
3. 生物安全：阪歧腸桿菌為條件致病菌，實驗廢棄物需高壓滅菌處理。

六、總結