還原糖（以葡萄糖計）檢測項目詳解

一、檢測原理

二、常見檢測方法

1. • 原理：還原糖與斐林試劑（酒石酸鉀鈉+CuSO?）在沸水浴中反應，生成磚紅色Cu?O沉淀，通過滴定計算糖含量。
   • 適用：常量分析（如蜂蜜、果汁中的高含量糖測定）。
   • 優點：成本低，無需精密儀器。
   • 缺點：操作繁瑣，主觀誤差大（依賴滴定終點顏色判斷）。
2. • 原理：還原糖在堿性條件下與DNS試劑反應生成棕紅色氨基化合物，540 nm處測吸光度。
   • 適用：微量分析（如發酵液、果蔬提取液）。
   • 優點：靈敏度高，適合批量樣品。
   • 缺點：需標準曲線，反應受溫度和時間影響。
3. • 原理：利用色譜柱分離單糖，通過示差折光檢測器或蒸發光散射檢測器定量。
   • 適用：精準區分不同糖類（如葡萄糖、果糖）。
   • 優點：高精度、高特異性。
   • 缺點：儀器昂貴，操作復雜。

三、關鍵檢測步驟（以DNS法為例）

1. • 脫蛋白：加入硫酸鋅和亞鐵氰化鉀沉淀蛋白質，離心后取上清。
   • 脫色：活性炭吸附色素（適用于深色樣品）。
   • 稀釋：調整濃度至標準曲線范圍內。
2. • 配制0.1~1.0 mg/mL葡萄糖標準液，與DNS試劑反應后測定吸光度，擬合回歸方程。
3. • 樣品液與DNS試劑1:1混合，沸水浴加熱5分鐘，冷卻后定容，測540 nm吸光度。
4. • ?C：由標準曲線得出的濃度（mg/mL）
   • ?V：樣品體積（mL）
   • ?m：樣品質量（g）
   • ?D：稀釋倍數

四、干擾因素與解決方案

1. 非還原糖干擾（如蔗糖）
   • 處理：酸水解（如6 mol/L HCl，70℃水浴15分鐘），轉化為還原糖后檢測。
2. 多糖干擾
   • 處理：酶解（淀粉酶）或酸水解，釋放還原性末端。
3. 金屬離子干擾
   • 處理：加入EDTA絡合干擾離子。

五、注意事項

1. 操作細節
   • DNS法需嚴格控制加熱時間（±10秒），避免顯色過度或不足。
   • 斐林試劑法滴定需在沸騰狀態下進行，防止返藍。
2. 儀器校準
   • 分光光度計預熱30分鐘，用空白調零。
3. 安全防護
   • 濃硫酸、強堿試劑需佩戴手套和護目鏡。
4. 數據驗證
   • 每批次樣品需加測質控樣（已知濃度葡萄糖液），回收率應達95%~105%。

六、方法選擇建議

七、應用案例

• 食品行業：檢測果汁中天然糖含量，評估甜度與營養價值。
• 發酵工程：監控發酵液中葡萄糖消耗速率，優化菌種培養條件。
• 質量控制：確保乳制品中無異常水解導致的還原糖超標。