乳酸菌數檢測：關鍵項目與方法解析

一、乳酸菌檢測的核心項目

1. • 檢測目的：量化產品中存活乳酸菌的數量，確保其達到宣稱的活菌濃度（如≥1×10? CFU/g）。
   • 常用方法：
     • 平板涂布法（Plate Count）：將樣品梯度稀釋后涂布于選擇性培養基（如MRS培養基），厭氧培養48小時后計數菌落。
     • 流式細胞術：通過熒光標記區分活菌與死菌，適用于快速檢測（如乳制品在線監控）。
   • 標準依據：
     • 中國：GB 4789.35-2016《食品微生物學檢驗 乳酸菌檢驗》
     • 國際：ISO 15214:1998（微生物學-乳酸菌計數）
2. • 檢測目的：確認產品中乳酸菌的種屬是否符合標識要求（如鼠李糖乳桿菌LGG、嗜酸乳桿菌等），排除雜菌污染。
   • 方法：
     • 生化鑒定：通過糖發酵實驗、酶活性測試（API 50 CHL系統）。
     • 分子生物學：16S rRNA基因測序、PCR-DGGE（變性梯度凝膠電泳）或MALDI-TOF MS（基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜）。
3. • 耐酸與耐膽鹽能力（存活率測試）：
     • 模擬胃液（pH 2.0，含胃蛋白酶）和腸液（含0.3%膽鹽）處理菌體，檢測處理前后活菌數變化，評估菌株在消化道中的定植能力。
   • 代謝產物分析：
     • 有機酸檢測（如乳酸、乙酸）：HPLC（高效液相色譜法）定量，評估產酸能力。
     • 抑菌物質檢測：通過瓊脂擴散法檢測對致病菌（如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌）的抑制效果。
4. • 耐藥基因篩查：PCR檢測是否攜帶抗生素抗性基因（如ermB、tetM），確保菌株無基因水平轉移風險。
   • 致病性評估：溶血實驗（血瓊脂平板）、細胞毒性測試，排除潛在致病性。

二、檢測流程中的關鍵控制點

1. • 固體樣品需均質化（如無菌生理鹽水稀釋），液態樣品需避免劇烈振蕩導致菌體損傷。
   • 含脂類或蛋白質的樣品（如酸奶）需加入蛋白酶或吐溫-80消除干擾。
2. • 活菌計數法局限性：部分乳酸菌可能因進入“活的非可培養狀態”（VBNC）被低估，需結合ATP生物發光法補充檢測。
   • 分子鑒定的優勢：可區分同源性高的近緣種（如植物乳桿菌vs.副干酪乳桿菌），避免傳統方法的誤判。
3. • 活菌數需根據產品類型對照標準：例如，中國《益生菌類保健食品評審規定》要求保質期內活菌數≥10? CFU/mL(g)。
   • 菌種鑒定結果需與《可用于食品的菌種名單》（中國衛健委發布）匹配，確保合規性。

三、常見問題與解決方案

四、未來技術趨勢

1. 高通量測序技術：用于復雜樣品（如發酵食品）中乳酸菌群落結構解析。
2. 微流控芯片：實現單菌水平的快速檢測與分選。
3. 生物傳感器：基于阻抗或熒光信號的無標記活菌實時監測。

五、