水溶性總糖檢測：核心檢測項目與方法解析

一、檢測項目的定義與范圍

• 單糖（如葡萄糖、果糖）
• 雙糖（如蔗糖、麥芽糖）
• 低聚糖（如低聚果糖） 檢測需排除淀粉、纖維素等不溶性多糖的干擾。

二、檢測原理

1. 酚-硫酸法：糖在濃硫酸作用下脫水生成糠醛衍生物，與苯酚反應形成橙黃色化合物（最大吸收波長490 nm）。
2. DNS（3,5-二硝基水楊酸）法：還原糖在堿性條件下將DNS還原為棕紅色氨基化合物（540 nm測定）。
3. 蒽酮-硫酸法：糖與蒽酮在濃硫酸中生成藍綠色復合物（620 nm測定）。

三、核心檢測項目與步驟

1. 樣品前處理

• 研磨與提取：固體樣品需粉碎后用水或乙醇溶液（80%乙醇常用）提取，去除不溶性雜質。
• 去除非糖干擾：
  • 蛋白質去除：加入中性蛋白酶或三氯乙酸沉淀。
  • 色素與多酚去除：活性炭吸附或聚酰胺過濾。
• 離心與過濾：3000 rpm離心10分鐘，取上清液備用。

2. 標準曲線制備

• 使用葡萄糖或蔗糖標準品配制梯度濃度溶液（如0–100 μg/mL），顯色后測定吸光度，擬合線性方程（R²≥0.99）。

3. 顯色反應與測定

• 酚-硫酸法流程：
  1. 取0.5 mL樣品液，加入5%苯酚溶液0.5 mL。 2 迅速加入濃硫酸2.5 mL，混勻后靜置30分鐘。
  2. 490 nm波長下測定吸光度，代入標準曲線計算濃度。

4. 計算結果

• 公式：總糖含量（%）= ?×?×??×106×100W×106C×V×D?×100
  • ?C：標準曲線得出的濃度（μg/mL）
  • ?V：樣品體積（mL）
  • ?D：稀釋倍數
  • ?W：樣品質量（g）

四、檢測關鍵點與誤差控制

1. 樣品代表性：需均質化處理，避免局部糖分分布不均。
2. 顯色穩定性：
   • 嚴格控制反應溫度（20–30℃）與時間（±1分鐘）。
   • 高濃度硫酸釋放熱量需快速混勻。
3. 干擾排除：
   • 含蛋白質的樣品需提前沉淀處理。
   • 深色樣品（如蜂蜜）需活性炭脫色。
4. 標準品選擇：若樣品以蔗糖為主，需酸水解后檢測還原糖，避免低估。

五、應用領域與實例

1. 食品工業：果汁、乳制品中總糖含量合規性檢測。
2. 農業研究：作物果實成熟度評估（如葡萄、蘋果糖積累動態）。
3. 醫藥領域：口服液、糖漿的含糖量控制。
4. 科研實驗：微生物發酵液中碳源利用率分析。

六、常見問題與解決

七、總結