傳染性肌壞死病病毒分子生物學檢測概述

傳染性肌壞死?。↖nfectious Myonecrosis, IMN）是由傳染性肌壞死病病毒（IMNV）引起的一種嚴重威脅對蝦養殖業的病毒性疾病，主要感染南美白對蝦等經濟蝦類。該病毒可通過水體、餌料、生物載體等途徑傳播，造成蝦體肌肉組織壞死、死亡率升高，導致重大經濟損失。隨著分子生物學技術的發展，病毒檢測方法逐漸從傳統的病理學觀察轉向高靈敏度、高特異性的分子檢測技術，為IMNV的早期診斷和防控提供了重要支持。

分子生物學檢測的核心是通過對IMNV的核酸（RNA或DNA）進行特異性識別與分析，實現病毒的快速、精準鑒定。相較于免疫學方法，分子檢測技術能夠更早發現病毒潛伏感染，并有效區分不同基因型，為流行病學研究和疫苗開發奠定基礎。以下從檢測項目、儀器、方法及標準等方面展開詳細說明。

檢測項目

IMNV分子生物學檢測的主要項目包括：
1. 病毒核酸定性檢測：確認樣本中是否存在IMNV特異性核酸片段；
2. 病毒載量定量分析：通過實時熒光定量PCR測定病毒RNA拷貝數，評估感染程度；
3. 基因分型與突變分析：針對病毒基因組保守區與變異區進行測序，追蹤病毒進化及毒株差異。

檢測儀器

檢測過程中需使用以下核心儀器設備：
1. 實時熒光定量PCR儀（如ABI 7500、Bio-Rad CFX96）：用于病毒核酸的擴增與實時監測；
2. 核酸提取儀（如QIAGEN QIAcube）：自動化提取樣本中的病毒RNA；
3. 電泳系統與凝膠成像儀：驗證PCR產物特異性；
4. 高通量測序平臺（如Illumina MiSeq）：用于全基因組測序及變異分析。

檢測方法

目前主流的分子檢測方法包括：
1. RT-PCR檢測：設計IMNV特異性引物（如針對RdRp基因區域），通過反轉錄-聚合酶鏈反應擴增目標序列；
2. 實時熒光定量PCR（qPCR）：采用TaqMan探針技術，實現病毒載量的動態監測；
3. 環介導等溫擴增技術（LAMP）：適用于現場快速檢測，無需復雜儀器；
4. 二代測序技術（NGS）：用于病毒全基因組解析及新變異株的發現。

檢測標準

IMNV分子檢測需遵循國際與行業標準：
1. OIE《水生動物衛生法典》：規定檢測方法的靈敏度（≤10拷貝/反應）和特異性要求；
2. GB/T 34748-2017（中國對蝦傳染性肌壞死病診斷技術）：明確RT-PCR引物序列及反應條件；
3. ISO 20310:2018：規范核酸提取、擴增及結果判讀流程；
4. 實驗室內部需通過陽性對照、陰性對照和重復試驗確保檢測結果的可靠性，定期參與國際能力驗證（如NACA實驗室間比對）。