一、無菌檢驗的定義與適用范圍

1. 最終滅菌產品：如注射劑、眼用制劑、植入性醫療器械等。
2. 非最終滅菌產品：需結合生產過程的無菌保障體系（如無菌生產工藝）。

二、核心檢測項目

1. 常規微生物檢測

• • 目標微生物：需氧條件下生長的細菌（如枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌等）。
  • 培養基：硫乙醇酸鹽流體培養基（用于需氧及兼性厭氧菌）。
  • 培養條件：30~35℃，14天。
• • 目標微生物：專性厭氧菌（如產氣莢膜梭菌）。
  • 培養基：硫乙醇酸鹽流體培養基（下層厭氧環境）。
  • 培養條件：30~35℃，14天，維持厭氧環境。
• • 目標微生物：霉菌和酵母菌（如白色念珠菌、黑曲霉）。
  • 培養基：沙氏葡萄糖液體培養基。
  • 培養條件：20~25℃，14天。

2. 特定病原體篩查（依產品風險增加）

• 示例項目：
  • 金黃色葡萄球菌（醫療器械、注射劑）
  • 銅綠假單胞菌（滴眼液、沖洗液）
  • 梭狀芽孢桿菌（生物制品）

3. 培養基適用性檢查

• 目的：驗證培養基支持微生物生長的能力及無菌性。
• 關鍵指標：
  • 促生長能力：接種＜100 CFU的標準菌株，觀察生長情況。
  • 抑菌特性：含防腐劑產品需驗證中和效果。

4. 方法學驗證

• 適用性試驗：確認檢測方法對樣品的適用性（如抑菌性消除）。
• 陽性對照：加入標準菌株（如生孢梭菌、白色念珠菌），驗證檢測敏感性。

三、檢測方法與技術

1. 薄膜過濾法（首選方法）

• 原理：通過孔徑≤0.45 μm的濾膜截留微生物，沖洗后轉移至培養基培養。
• 適用性：適用于水溶性液體、可溶解固體制劑。
• 優勢：可消除樣品抑菌性，提高靈敏度。

2. 直接接種法

• 原理：將樣品直接接種至培養基中培養。
• 適用性：適用于無法過濾的樣品（如油劑、混懸液）。
• 局限性：需驗證中和劑有效性。

四、無菌檢驗流程

1. 樣品預處理：根據產品特性選擇溶解、稀釋或中和處理。
2. 分裝與接種：按標準操作分裝至對應培養基。
3. 培養觀察：按溫度和時間要求培養，每日觀察渾濁度變化。
4. 結果判定：
   • 陰性：所有培養基均澄清，判為無菌。
   • 陽性：任一培養基渾濁，需復檢并調查污染源。

五、關鍵注意事項

1. 實驗室環境控制：
   • 操作應在B級背景下的A級超凈臺或隔離器中進行。
   • 定期進行環境微生物監測。
2. 假陰性風險控制：
   • 避免抑菌性殘留（充分沖洗或中和）。
   • 驗證培養基促生長能力。
3. 假陽性風險控制：
   • 嚴格無菌操作技術，防止環境微生物污染。
   • 培養基預培養確認無菌性。

六、標準與法規依據

• 《中國藥典》（ChP）：四部通則“1101 無菌檢查法”。
• USP <71> Sterility Tests：美國藥典標準。
• ISO 11737-2：醫療器械滅菌微生物學方法。

七、未來發展趨勢

1. 快速檢測技術：ATP生物發光法、流式細胞術替代傳統培養法。
2. 自動化設備：全自動無菌檢測系統減少人為誤差。
3. 分子生物學技術：PCR、宏基因組學用于快速污染溯源。