病毒性腦病和視網膜病（Viral Encephalopathy and Retinopathy, VERV）是一種由魚類神經壞死病毒（Betanodavirus）引起的嚴重傳染性疾病，主要影響海水和淡水魚類，如鱸魚、石斑魚和金槍魚等。該疾病以中樞神經系統炎癥和視網膜病變為特征，導致魚類出現異常游動、失明、高死亡率（可達90%以上），對水產養殖業造成巨大經濟損失。VERV的傳播途徑包括水體、受感染魚苗或污染物，其潛伏期短、傳染性強，因此在養殖密集區極易爆發疫情。早期檢測和診斷對控制疫情至關重要，可有效減少種群損失、優化養殖管理，并通過隔離措施防止病毒擴散。隨著分子生物學和免疫學技術的發展，VERV檢測方法日益精準，本文將從檢測項目、儀器、方法及標準四個方面進行詳細闡述。

檢測項目

VERV的檢測項目主要圍繞病毒特異性標志物展開，涵蓋分子水平、免疫學和病理學等多個維度。核心檢測項目包括：病毒核酸（RNA）檢測，通過靶向病毒基因（如RNA2片段）確認感染；特異性抗體篩查，用于評估免疫反應；以及病理組織學檢查，分析腦和視網膜病變。其他輔助項目涉及病毒分離培養、血清學滴度測定和環境樣本（如水或飼料）的病毒載量評估。這些項目旨在實現早期診斷、感染溯源和流行病學調查，其中核酸檢測是目前最常用的金標準項目。

檢測儀器

VERV檢測依賴一系列高精實驗室儀器，確保結果的準確性和可重復性。主要儀器包括：核酸提取儀（如QIAGEN QIAcube），用于從魚組織樣本中純化RNA；實時熒光定量PCR儀（如Bio-Rad CFX96），進行病毒基因擴增和定量分析；酶標儀（如Thermo Scientific Multiskan），用于ELISA檢測中的吸光度讀數；以及顯微鏡（如Olympus BX53），觀察病理切片中的細胞病變。此外，輔助設備如離心機（用于樣本前處理）、恒溫培養箱（用于病毒培養）和生物安全柜（確保操作安全）也必不可少。現代便攜式設備如側流免疫層析試紙閱讀器，正逐步應用于現場快速檢測。

檢測方法

VERV的檢測方法主要包括分子生物學、血清學和病理學三類技術，各具優勢。分子生物學方法最常用的是逆轉錄實時熒光定量PCR（RT-qPCR），其靈敏度高（可檢出低至10拷貝/μL的病毒RNA），特異性強，適用于早期篩查。血清學方法以酶聯免疫吸附試驗（ELISA）為主，通過檢測魚血清中的IgM或IgG抗體間接診斷感染；病毒中和試驗則用于確認抗體活性。病理學方法涉及組織切片制備（如福爾馬林固定、石蠟包埋）和染色（H&E染色），顯微鏡下觀察神經元壞死或視網膜脫落等病變。快速診斷方法如免疫層析試紙（Lateral Flow Assay）可在15分鐘內獲得結果，適合野外應用。所有方法需嚴格遵循無菌操作，避免交叉污染。

檢測標準

VERV檢測的國際和國內標準旨在確保診斷的規范性、可比性和可信度。核心標準包括：世界動物衛生組織（OIE）《水生動物疾病診斷手冊》中規定的VERV診斷指南，涵蓋采樣規范、實驗室流程和陽性判定閾值（如RT-qPCR的Ct值≤35為陽性）；以及國際標準化組織（ISO）的ISO/IEC 17025，要求實驗室建立質量管理體系。中國國家標準如GB/T 34747-2017《魚類病毒性腦病和視網膜病診斷技術》詳細規定了PCR和ELISA的操作標準。此外，檢測需參考Cut-off值（如ELISA的OD值≥0.2為陽性），并定期進行能力驗證（如OIE的PT項目）。陰性/陽性對照品的使用和報告格式也需符合標準，以支持疫情監控。