傳染性造血器官壞死病毒核酸檢測
實(shí)驗(yàn)室擁有眾多大型儀器及各類分析檢測設(shè)備，研究所長期與各大企業(yè)、高校和科研院所保持合作伙伴關(guān)系，始終以科學(xué)研究為首任，以客戶為中心，不斷提高自身綜合檢測能力和水平，致力于成為全國科學(xué)材料研發(fā)領(lǐng)域服務(wù)平臺(tái)。
立即咨詢聯(lián)系中化所
傳染性造血器官壞死病毒核酸檢測
傳染性造血器官壞死病（Infectious Hematopoietic Necrosis， IHN）是由傳染性造血器官壞死病毒（IHNV）引起的一種嚴(yán)重威脅鮭鱒魚類（尤其是虹鱒、大鱗大麻哈魚等）的烈性傳染病。該病主要侵害魚類的造血組織和腎、脾等器官，導(dǎo)致幼魚出現(xiàn)游動(dòng)異常、體色發(fā)黑、腹部膨大、肛門拖便、鰓絲貧血蒼白等癥狀，死亡率極高，給鮭鱒魚養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于其高度傳染性和致死性，IHNV被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH，原OIE）列為必須申報(bào)的水生動(dòng)物疫病。
核酸檢測作為IHNV診斷的核心技術(shù)，因其具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測快速等顯著優(yōu)勢，已成為病原確診、疫情監(jiān)測、口岸檢疫和引種風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估不可或缺的關(guān)鍵手段。通過檢測病毒特異的核酸序列（主要是核蛋白基因N、糖蛋白基因G或非編碼區(qū)），可以精準(zhǔn)地識(shí)別IHNV，即使在感染早期或無癥狀攜帶階段也能有效檢出，為及時(shí)采取防控措施提供科學(xué)依據(jù)。
檢測項(xiàng)目
IHNV核酸檢測的主要項(xiàng)目包括：
1. IHNV 病毒鑒定： 確認(rèn)樣本中是否存在IHNV的特異性核酸片段，是診斷IHN疾病的基礎(chǔ)。
2. IHNV 病毒載量測定： 利用定量方法（如實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR）測定樣本中的病毒核酸拷貝數(shù)或濃度，用于評(píng)估感染嚴(yán)重程度、藥物療效或宿主排毒動(dòng)態(tài)。
3. IHNV 毒株分型/基因型分析： 通過擴(kuò)增特定基因（如G基因）并進(jìn)行測序分析，確定IHNV毒株的基因型（如U、M、L型）或遺傳變異情況，對(duì)流行病學(xué)溯源、疫苗株選擇及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估具有重要意義。
4. IHNV 宿主溯源檢測： 結(jié)合病毒檢測和宿主特異性標(biāo)記（如魚類線粒體DNA），分析病毒感染來源。
5. 流行病學(xué)調(diào)查與研究： 監(jiān)測養(yǎng)殖場、野生水域或交易市場中IHNV的流行情況、分布特點(diǎn)及遺傳多樣性。
檢測儀器
IHNV核酸檢測通常在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，主要依賴以下核心儀器設(shè)備：
1. 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀： 進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）的核心設(shè)備，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增和實(shí)時(shí)熒光信號(hào)檢測，用于病毒的定量分析。這是目前最常用的檢測儀器。
2. 普通 PCR 儀： 用于進(jìn)行常規(guī)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）或巢式PCR（nested PCR）擴(kuò)增目標(biāo)核酸片段。
3. 核酸提取儀： 自動(dòng)化完成樣本（魚的組織、體液或環(huán)境樣本）中病毒RNA的提取和純化工作，提高效率和一致性。常用方法基于磁珠法或離心柱法。
4. 凝膠電泳系統(tǒng)： 用于對(duì)普通PCR或RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，通過條帶大小判斷擴(kuò)增是否成功及特異性（適用于定性檢測）。
5. 基因測序儀： 用于對(duì)擴(kuò)增出的目的基因片段進(jìn)行核苷酸序列測定，是病毒分型、遺傳變異分析和確認(rèn)檢測特異性的金標(biāo)準(zhǔn)。
6. 超低溫冰箱： 用于保存樣本、提取的核酸、酶和試劑等。
7. 超凈工作臺(tái)/生物安全柜： 提供無菌操作環(huán)境，防止樣本污染和環(huán)境釋放。
8. 離心機(jī)、移液器、渦旋振蕩器、水浴鍋/金屬?。?/strong> 常規(guī)分子實(shí)驗(yàn)必備設(shè)備。
檢測方法
IHNV核酸檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法學(xué)流程通常包括以下步驟：
1. 樣本采集與處理： 采集病魚或疑似感染魚的腎、脾、肝、腦或心臟組織，或精液、卵液、腹水等體液。組織樣本需剪碎勻漿，離心取上清液作為待檢樣本。環(huán)境樣本（如池水、沉積物）也需經(jīng)過富集處理。
2. 病毒核酸（RNA）提?。?/strong> 使用商品化的RNA提取試劑盒（通?；诖胖榉ɑ螂x心柱法），嚴(yán)格按照操作規(guī)程從樣本上清液中提取病毒總RNA。提取過程中需設(shè)立陰性對(duì)照（如無核酸酶水）和陽性對(duì)照（已知的IHNV RNA或滅活病毒）以監(jiān)控提取效率和防止污染。
3. 逆轉(zhuǎn)錄（RT）： 利用逆轉(zhuǎn)錄酶（Reverse Transcriptase）和特異性引物或隨機(jī)引物/寡聚dT引物，將提取的病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA（cDNA）。
4. 核酸擴(kuò)增與檢測：
5. 結(jié)果判讀：
6. 測序確認(rèn)與分型： 對(duì)于陽性樣本，特別是關(guān)鍵樣本或需要分型的樣本，可將RT-PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化后送測序。將獲得的序列與已知IHNV序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)分析，確認(rèn)病毒身份并進(jìn)行基因分型。
檢測標(biāo)準(zhǔn)
為確保IHNV核酸檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可比性，實(shí)驗(yàn)室檢測必須嚴(yán)格遵守國內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)規(guī)范：
1. WOAH (OIE) 標(biāo)準(zhǔn)： 世界動(dòng)物衛(wèi)生組織《水生動(dòng)物疾病診斷手冊(cè)》中關(guān)于“傳染性造血器官壞死病”的章節(jié)詳細(xì)規(guī)定了IHN的診斷方法，包括臨床診斷、組織病理學(xué)診斷、病毒分離和包括RT-PCR在內(nèi)的分子生物學(xué)檢測方法。該手冊(cè)是國際通行的權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)
掃一掃關(guān)注公眾號(hào)
