馬鼻疽ELISA檢測的重要性

馬鼻疽（Glanders）是由鼻疽伯克霍爾德菌（Burkholderia mallei）引起的一種高度傳染性人畜共患病，主要感染馬、騾、驢等單蹄動物，也可通過接觸傳播給人類。由于其高致死率和潛在的生物安全威脅，國際動物衛生組織（OIE）將其列為必報疫病。ELISA（酶聯免疫吸附試驗）作為一種高效、靈敏的血清學檢測方法，被廣泛應用于馬鼻疽的早期篩查、疫情監測和流行病學調查中。該技術通過檢測動物血清中的特異性抗體或抗原，能夠快速識別感染個體，為疫病防控提供科學依據。

檢測項目

馬鼻疽ELISA檢測的核心項目包括：
1. 抗體檢測：通過捕捉血清中的IgG或IgM抗體，判斷動物是否接觸或感染鼻疽伯克霍爾德菌。
2. 抗原檢測：直接檢測樣本中的病原體特異性蛋白（如TssA、BimA等），用于早期感染的確認。
3. 定量分析：通過標準曲線計算抗體效價，評估感染程度和免疫應答水平。

檢測儀器

開展ELISA檢測需配備以下關鍵儀器：
- 酶標儀（微孔板讀數儀）：用于測定反應后的吸光度值，推薦使用多波長檢測型設備（如BioTek Synergy系列）。
- 洗板機：確保洗滌過程的標準化，降低背景干擾。
- 恒溫孵育箱：控制反應溫度（通常37℃±1℃）。
- 微量移液器及多通道移液器：保障加樣精度和效率。

檢測方法

馬鼻疽ELISA檢測采用間接法或夾心法，標準操作流程如下：
1. 包被：將純化的重組抗原（如B. mallei LPS）固定于96孔板。
2. 封閉：使用牛血清白蛋白（BSA）封閉非特異性結合位點。
3. 加樣：加入稀釋后的待測血清及陰陽性對照，孵育后洗滌。
4. 二抗反應：加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗馬IgG抗體。
5. 顯色與終止：添加TMB底物顯色，硫酸終止反應。
6. 讀數分析：在450nm波長下讀取OD值，計算樣本/陰性（S/N）比值判定結果。

檢測標準

馬鼻疽ELISA檢測需嚴格遵循以下標準：
- OIE手冊：采用推薦抗原及判定閾值（通常S/N≥2.1為陽性）。
- GB/T 22915-2008：中國國家標準規定樣本采集、保存及檢測程序。
- 質量控制要求：陰陽性對照OD值需在預設范圍內，板內變異系數（CV）≤15%。
- 生物安全規范：實驗操作需在BSL-2級以上實驗室進行，防止病原泄漏。

通過標準化ELISA檢測體系，可實現馬鼻疽的高效監測，為跨境動物運輸檢疫和疫區凈化提供關鍵技術支撐。