雞傳染性喉氣管炎瓊脂擴散試驗檢測概述

雞傳染性喉氣管炎（Infectious Laryngotracheitis, ILT）是由皰疹病毒科α皰疹病毒屬的雞傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）引起的一種急性呼吸道傳染病，具有高傳染性和致死性。該病可通過直接接觸或氣溶膠傳播，嚴重影響?zhàn)B禽業(yè)的經濟效益。瓊脂擴散試驗（Agar Gel Immunodiffusion, AGID）作為一種經典的血清學檢測方法，因其操作簡便、成本低、結果直觀等特點，被廣泛應用于ILTV抗體或抗原的檢測，為疫病診斷和免疫效果評估提供重要依據(jù)。

檢測項目

瓊脂擴散試驗在雞傳染性喉氣管炎檢測中主要應用于以下兩類項目：
1. 抗原檢測：通過檢測病雞呼吸道分泌物或組織中的ILTV抗原，直接確認病毒感染。
2. 抗體檢測：評估雞群疫苗接種后的免疫應答水平或自然感染后的抗體動態(tài)變化。
檢測樣品通常包括氣管拭子、肺組織勻漿液或血清，需根據(jù)檢測目標選擇合適樣本。

檢測儀器與試劑

瓊脂擴散試驗所需核心儀器及試劑包括：
- 電泳儀或恒溫培養(yǎng)箱：用于維持瓊脂板在37℃恒溫環(huán)境中反應。
- 微量移液器及吸頭：精確加樣，保證孔間距離一致。
- 瓊脂糖：制備1%-1.5%濃度的瓊脂凝膠。
- 標準抗原和陽性血清：作為試驗對照，確保結果可靠性。
- 染色劑（如考馬斯亮藍）：增強沉淀線的可見性。

檢測方法

瓊脂擴散試驗操作步驟如下：
1. 瓊脂板制備：將瓊脂糖溶于PBS緩沖液，加熱溶解后傾注于平皿，厚度約3mm。
2. 打孔：待瓊脂凝固后，使用打孔器形成中心孔及周邊6個放射狀孔，孔徑3-4mm，孔距4-5mm。
3. 加樣：中心孔加入已知抗原（或抗體），周邊孔依次加入待測樣本、陽性對照和陰性對照。
4. 擴散反應：將瓊脂板置于濕盒中，37℃孵育18-24小時，觀察沉淀線形成。
5. 結果判定：若待測孔與中心孔間出現(xiàn)清晰沉淀線，且與陽性對照沉淀線完全融合，則判定為陽性。

檢測標準

瓊脂擴散試驗需遵循以下標準規(guī)范：
- OIE標準：世界動物衛(wèi)生組織（WOAH）《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》中規(guī)定的抗原抗體反應判定規(guī)則。
- GB/T 23197-2008：中國國家標準《雞傳染性喉氣管炎診斷技術》中明確瓊脂擴散試驗的操作流程及結果解釋。
- 質量控制要求：每批次試驗需設置陰陽性對照，沉淀線寬度需≥1mm，且陰性對照無交叉反應。

總之，瓊脂擴散試驗是雞傳染性喉氣管炎監(jiān)測的重要工具，但其靈敏度較低，適用于群體篩查而非個體確診。實際應用中常結合PCR、病毒分離等分子生物學方法進行綜合判斷，以提高檢測準確性。