雞傳染性鼻炎瓊脂免疫擴散試驗檢測概述

雞傳染性鼻炎（Infectious Coryza, IC）是由副雞禽桿菌（Avibacterium paragallinarum）引起的一種急性呼吸道傳染病，對養禽業造成嚴重經濟損失。瓊脂免疫擴散試驗（Agar Gel Immunodiffusion, AGID）是檢測該病抗原或抗體的經典方法之一，具有操作簡便、成本低廉、特異性較高等特點，廣泛應用于實驗室診斷和流行病學調查。該技術通過抗原與抗體在瓊脂凝膠中的擴散形成沉淀線，直觀反映樣本中目標成分的存在，特別適用于基層實驗室的初步篩查和疫苗免疫效果評估。

檢測項目

瓊脂免疫擴散試驗主要用于檢測以下兩類項目： 1. 抗原檢測：針對副雞禽桿菌的K抗原或型特異性抗原，用于病原體分型或急性感染期樣本的直接檢測。 2. 抗體檢測：通過已知抗原檢測血清中的特異性抗體，評估雞群免疫狀態或感染后的抗體動態變化。

檢測儀器與試劑

試驗所需核心儀器包括： - 瓊脂糖凝膠板制備系統（含加熱磁力攪拌器、水平臺） - 打孔器及模板（孔徑3-4mm，孔距3-5mm） - 溫控培養箱（37℃±1℃，濕度60%-70%） - 紫外透射儀或暗視野觀察箱 關鍵試劑包括：標準陽性抗原/抗體、瓊脂糖（純度≥1.5%）、巴比妥緩沖液（pH 8.6）及染色劑（如考馬斯亮藍）。

檢測方法與步驟

試驗流程分為以下步驟： 1. 瓊脂板制備：將1%瓊脂糖與緩沖液混合，加熱溶解后倒入平皿形成3mm厚凝膠層。 2. 打孔與加樣：采用梅花形孔陣，中央孔加入標準抗原，周圍孔分別加待檢血清和陰陽性對照。 3. 擴散反應：濕盒內37℃孵育24-48小時，抗原抗體在凝膠中擴散形成沉淀線。 4. 結果判讀：肉眼觀察沉淀線融合情況，陽性樣本與標準抗原/抗體間出現清晰連續的沉淀帶。

檢測標準與質量控制

試驗需嚴格遵循以下標準： - 國家標準：NY/T 551-2020《雞傳染性鼻炎診斷技術》中AGID操作規范。 - 國際參考：OIE《陸生動物診斷試驗手冊》規定的抗原效價（≥1:16）和血清稀釋度（通常1:4-1:8）。 質量控制要點包括：每批次試驗必須設置陽性/陰性對照；抗原抗體需進行效價標定；環境溫度波動需≤±1℃；沉淀線判讀需由兩名實驗員獨立驗證。

注意事項與局限性

1. 抗原抗體比例需嚴格優化，避免前帶或后帶現象影響靈敏度。 2. 部分B型菌株可能出現交叉反應，需結合PCR或血清學分型確認。 3. 感染早期（＜7天）或免疫后2周內可能出現假陰性，建議動態采樣檢測。 4. 試驗靈敏度低于ELISA，陰性結果需結合臨床綜合判斷。

總結

瓊脂免疫擴散試驗作為雞傳染性鼻炎的傳統檢測手段，在基層實驗室仍具有重要應用價值。通過規范化的操作流程和嚴格的質量控制，可實現快速、經濟的初步診斷，為臨床防控提供關鍵依據。但需注意其局限性，必要時聯合分子生物學方法提高檢測準確性。