牛病毒性腹瀉/粘膜病（D/MD）概述

牛病毒性腹瀉/粘膜病（Bovine Viral Diarrhea/Mucosal Disease，D/MD）是由牛病毒性腹瀉病毒（DV）引起的一種高度接觸性傳染病，主要感染牛群，表現為發熱、腹瀉、黏膜糜爛、免疫抑制及繁殖障礙等癥狀。該病毒分為兩種基因型（DV-1和DV-2）及兩種生物型（致細胞病變型和非致細胞病變型），傳播途徑包括直接接觸、垂直傳播及污染物傳播。由于DV可導致牛群生產力下降、幼畜死亡率升高，且持續感染（PI）牛是主要傳染源，因此檢疫檢測是防控該病的關鍵環節。

檢測項目

DV檢疫檢測的核心項目包括： 1. **病毒分離與鑒定**：通過細胞培養分離病毒，結合免疫熒光或PCR技術確認病毒存在。 2. **抗原檢測**：針對血液、組織或分泌物中的病毒抗原進行檢測，常用ELISA或免疫組化法。 3. **抗體檢測**：通過血清學方法（如ELISA、中和試驗）檢測抗體水平，區分感染狀態及免疫效果。 4. **分子生物學檢測**：采用RT-PCR、熒光定量PCR（qPCR）檢測病毒核酸，適用于早期診斷和分型。 5. **持續性感染（PI）篩查**：通過兩次間隔3周以上的抗原或核酸檢測，確認犢牛是否為PI個體。

檢測儀器與設備

DV檢測需依賴專業儀器，主要包括： - **PCR儀**：用于核酸擴增及熒光定量檢測（如實時熒光定量PCR儀）。 - **酶標儀**：配合ELISA試劑盒進行抗原或抗體定量分析。 - **細胞培養設備**：包括CO?培養箱、生物安全柜等，用于病毒分離。 - **熒光顯微鏡**：觀察免疫熒光標記的病毒抗原。 - **電泳儀與凝膠成像系統**：用于PCR產物分析及核酸電泳驗證。

檢測方法

1. **病毒分離法**： - 采集血液、鼻拭子或病變組織樣本，接種于敏感細胞（如MDBK細胞）。 - 觀察細胞病變效應（CPE），結合免疫熒光或PCR確認病毒。 2. **ELISA檢測**： - 使用商品化試劑盒檢測血清中的抗體或抗原，適用于大規模篩查。 3. **RT-PCR/qPCR**： - 提取樣本RNA，設計特異性引物（如針對5'-UTR、E2基因），進行核酸擴增及分型。 4. **中和試驗**： - 將血清與已知病毒混合后接種細胞，通過CPE抑制情況評估中和抗體效價。

檢測標準與規范

DV檢測需遵循以下標準： 1. **國際標準**： - OIE《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》中關于DV的檢測流程與判定標準。 2. **國家標準**： - 中國《牛病毒性腹瀉/粘膜病診斷技術》（GB/T 18637-2018），涵蓋病毒分離、ELISA及PCR方法。 3. **行業規范**： - 要求實驗室通過生物安全二級（BSL-2）認證，確保檢測過程的安全性。 4. **結果判定**： - RT-PCR陽性需通過測序驗證；ELISA結果需結合臨界值（Cut-off值）判定；持續性感染需兩次檢測均陽性。

通過科學規范的檢測流程、精準的儀器應用及嚴格的標準執行，可有效控制DV的傳播，保障牛群健康與養殖業經濟效益。