雞傳染性法氏囊病酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)概述

雞傳染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease, IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（IBDV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病，主要侵害雛雞和青年雞的免疫器官——法氏囊，導(dǎo)致免疫抑制，增加繼發(fā)感染風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）作為一種高靈敏度、高特異性的免疫學(xué)檢測(cè)方法，被廣泛用于IBD的抗原和抗體檢測(cè)，為疾病診斷、免疫效果評(píng)估及流行病學(xué)調(diào)查提供重要依據(jù)。通過ELISA檢測(cè)，可快速篩查感染雞群，監(jiān)測(cè)疫苗免疫后的抗體水平，從而優(yōu)化防控策略。

檢測(cè)項(xiàng)目

IBD的ELISA檢測(cè)主要分為兩類：一是病毒抗原檢測(cè)，用于直接檢測(cè)病雞組織或分泌物中的IBDV抗原；二是抗體檢測(cè)，用于評(píng)估雞群免疫后的血清抗體水平或自然感染后的抗體反應(yīng)。抗原檢測(cè)適用于早期感染的快速診斷，而抗體檢測(cè)則用于免疫程序評(píng)估和群體免疫狀態(tài)分析。

檢測(cè)儀器與試劑

ELISA檢測(cè)需配備以下核心儀器與試劑： 1. **酶標(biāo)儀**：用于讀取反應(yīng)孔的光密度（OD值），需具備450nm波長(zhǎng)濾光片； 2. **洗板機(jī)**：確保反應(yīng)孔洗滌徹底，減少背景干擾； 3. **微量移液器**（單道、多道）：精確加樣，保證檢測(cè)重復(fù)性； 4. **預(yù)包被ELISA試劑盒**：通常包含IBDV抗原包被板、酶標(biāo)二抗、顯色底物（如TMB）、終止液等； 5. 其他輔助設(shè)備：如恒溫培養(yǎng)箱（37℃）、振蕩器等。

檢測(cè)方法步驟

ELISA檢測(cè)流程包括以下關(guān)鍵步驟： 1. **包被與封閉**：將IBDV抗原固定于微孔板，隨后用封閉液（如牛血清白蛋白）封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)； 2. **加樣與孵育**：加入待檢血清或組織樣本，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，37℃孵育使抗原-抗體結(jié)合； 3. **洗滌**：用PBST緩沖液清洗未結(jié)合物質(zhì)； 4. **酶標(biāo)二抗結(jié)合**：加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗雞IgG抗體，再次孵育； 5. **顯色與終止**：加入顯色底物TMB，避光反應(yīng)后加終止液終止反應(yīng)； 6. **OD值測(cè)定**：通過酶標(biāo)儀讀取450nm處的吸光度值，計(jì)算樣本與陰性對(duì)照的比值（S/N）判定結(jié)果。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與結(jié)果判定

檢測(cè)需遵循相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)： - **國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)**：如《GB/T 19167-2003 傳染性法氏囊病診斷技術(shù)》中推薦的ELISA方法； - **國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)**：參考世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)》的檢測(cè)流程。 結(jié)果判定通常以臨界值（Cut-off值）為依據(jù)，若樣本OD值≥臨界值（通常為陰性對(duì)照均值+3倍標(biāo)準(zhǔn)差），則判定為陽(yáng)性，表明存在IBDV抗原或特異性抗體。

注意事項(xiàng)

1. 樣本處理需規(guī)范，血清應(yīng)避免溶血或反復(fù)凍融； 2. 試劑盒需嚴(yán)格按照說(shuō)明書保存（如2-8℃避光）； 3. 實(shí)驗(yàn)過程中需設(shè)置復(fù)孔，確保結(jié)果可靠性； 4. 操作環(huán)境需符合生物安全要求，避免交叉污染。