藍舌病EMAI阻斷ELISA抗體檢測概述

藍舌病（Bluetongue Disease）是由藍舌病毒（BTV）引起的一種以反芻動物為主要宿主的蟲媒性傳染病，可通過庫蠓等媒介傳播，對畜牧業造成嚴重威脅。為有效防控該病，抗體檢測成為流行病學監測和疫苗免疫評估的核心手段之一。其中，EMAI（澳大利亞動物健康實驗室）開發的阻斷ELISA（酶聯免疫吸附試驗）抗體檢測方法，因其高靈敏度、特異性及操作便捷性，被廣泛應用于藍舌病抗體的定性或定量分析。該技術通過檢測血清中針對病毒特定蛋白（如VP7或VP2）的IgG抗體，能夠快速判斷動物是否感染或接種過疫苗，為疫病防控提供科學依據。

檢測項目

藍舌病EMAI阻斷ELISA抗體檢測的核心項目包括：
1. 藍舌病毒特異性IgG抗體檢測：針對病毒結構蛋白VP7或非結構蛋白NS1的抗體檢出；
2. 抗體效價評估：通過標準曲線計算樣本的抗體濃度；
3. 群體免疫水平分析：用于規模化養殖場的免疫覆蓋率監測。

檢測儀器與試劑

檢測中需使用以下關鍵儀器與試劑：
- 儀器：酶標儀（450nm波長）、洗板機、恒溫孵育箱、微量移液器；
- 試劑盒：預包被VP7抗原的96孔板、辣根過氧化物酶（HRP）標記的阻斷單抗、樣本稀釋液、底物溶液（TMB）、終止液（硫酸）；
- 對照品：陽性對照血清、陰性對照血清及臨界值校準品。

檢測方法步驟

EMAI阻斷ELISA檢測流程分為以下關鍵步驟：
1. 樣本預處理：待檢血清按1:20比例稀釋，56℃滅活30分鐘；
2. 加樣與孵育：將稀釋樣本與酶標單抗同步加入抗原包被孔，37℃孵育60分鐘；
3. 洗滌：使用PBST緩沖液清洗未結合物質，重復5次；
4. 顯色與終止：加入TMB底物反應15分鐘后，用硫酸終止顯色；
5. 結果判讀：讀取OD450值，計算抑制率（PI%），判定抗體陽性（PI≥50%）或陰性。

檢測標準與質量控制

本檢測嚴格遵循國際及行業標準：
- OIE標準：《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》中藍舌病診斷技術要求；
- EMAI操作規范：試劑盒說明書規定的溫育時間、稀釋比例及臨界值判定規則；
- 質控要求：每批次實驗需滿足陽性對照OD值降低≥70%，陰性對照OD值≥1.0，否則需重復試驗。

通過上述標準化流程，藍舌病EMAI阻斷ELISA檢測可實現抗體水平的精準評估，為疫病監測和免疫策略制定提供可靠技術支撐。