牛副結核病檢疫檢測概述

牛副結核病（Paratuberculosis），又稱約翰氏病（Johne's disease），是由禽分枝桿菌副結核亞種（Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, MAP）引起的一種慢性消耗性傳染病。該病以持續性腹瀉、漸進性消瘦和腸黏膜增厚為特征，嚴重影響牛群生產性能并造成重大經濟損失。由于潛伏期長（2-5年）、早期癥狀隱蔽，檢疫檢測成為防控該病的關鍵環節。目前，國際上普遍采用病原學檢測、血清學檢測、分子生物學檢測及病理學檢測相結合的綜合方法，并依據OIE（世界動物衛生組織）和各國官方標準進行規范化操作。

檢測項目

牛副結核病的核心檢測項目包括：
1. 病原分離培養：通過糞便或組織樣本分離MAP病原體；
2. 抗體檢測：檢測血液或乳汁中的特異性IgG抗體；
3. 核酸檢測：利用PCR技術檢測MAP的IS900等特征性基因序列；
4. 病理學檢查：觀察腸系膜淋巴結和腸道病變特征。

檢測儀器與設備

主要檢測儀器包括：
- 微生物培養系統：全自動細菌培養箱、BACTEC MGIT 960分枝桿菌培養系統；
- 分子生物學設備：實時熒光定量PCR儀、核酸提取儀、電泳系統；
- 血清學檢測儀器：酶標儀（如BioTek ELx808）、全自動化學發光免疫分析儀；
- 病理學設備：組織切片機、光學顯微鏡及顯微成像系統。

檢測方法

1. 細菌培養法：采用Herrold氏卵黃培養基或Middlebrook 7H10培養基進行6-16周培養，結合抗酸染色鑒定；
2. ELISA檢測：使用商品化試劑盒（如IDEXX Paratuberculosis Screening Ab Test）檢測血清/乳汁抗體，靈敏度可達60-80%；
3. PCR技術：針對IS900、F57等特異性基因設計引物，實時熒光PCR檢測下限可達10^2 CFU/g糞便；
4. 病理組織學檢查：通過HE染色觀察肉芽腫病變，抗酸染色確認MAP存在。

檢測標準與規范

國際通用檢測標準包括：
- OIE《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》第3.1.16章；
- 中國國家標準《GB/T 18646-2018 動物副結核病診斷技術》；
- 歐盟法規（EC）No 854/2004關于乳用畜群的監測要求；
- 美國農業部（USDA）認證的糞便培養和血清學檢測流程。
檢測結果判定需結合流行病學調查，抗體陽性樣本需通過病原分離或PCR復檢確認。