藍舌病競爭酶聯免疫吸附試驗（cELISA）檢測概述

藍舌?。˙luetongue Disease, BT）是由藍舌病毒（BTV）引起的一種非接觸性、蟲媒傳播的動物傳染病，主要感染反芻動物，尤其是綿羊、牛和山羊。該病可通過庫蠓等媒介昆蟲傳播，對畜牧業造成嚴重經濟損失。為有效防控疫情，快速、準確的檢測技術至關重要。競爭酶聯免疫吸附試驗（cELISA）作為一種高特異性、高靈敏度的血清學檢測方法，被廣泛應用于藍舌病抗體檢測，為疫病監測、免疫評估和國際貿易檢疫提供科學依據。

檢測項目

藍舌病cELISA檢測主要針對血清或血漿中的抗BTV特異性抗體，尤其是針對病毒核心蛋白VP7的抗體。檢測項目包括：
1. 動物血清樣本中BTV抗體定性檢測（陽性/陰性判定）；
2. 抗體水平半定量分析（通過抑制率計算）；
3. 不同血清型（BTV-1至BTV-27）的交叉反應性檢測；
4. 免疫接種后抗體效價動態監測。

檢測儀器與試劑

主要儀器設備包括：
- 酶標儀（450nm波長檢測）
- 洗板機（自動或手動）
- 恒溫培養箱（37℃±1℃）
- 微量移液器（單道、多道）
- 振蕩器（用于試劑的混勻）
試劑組成通常包含：
- 預包被VP7抗原的微孔板
- 酶標單克隆抗體（HRP標記）
- 陽性對照血清和陰性對照血清
- TMB底物溶液、終止液
- 樣品稀釋液和洗滌緩沖液

檢測方法

cELISA檢測流程分為以下步驟：
1. 樣品處理：血清樣本按1:10至1:20比例稀釋；
2. 抗原包被：微孔板預先包被BTV特異性抗原；
3. 競爭反應：加入待測樣本和酶標抗體，37℃孵育60分鐘；
4. 洗滌：用PBST緩沖液清洗未結合的成分；
5. 顯色：加入TMB底物，避光顯色10-15分鐘；
6. 終止與讀數：加入終止液后，立即用酶標儀測量OD450值；
7. 結果判讀：計算抑制率（%）=（1-樣本OD值/陰性對照OD均值）×100%，通常抑制率≥50%判為陽性。

檢測標準

檢測遵循以下國際和國內標準：
- OIE《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》最新版
- GB/T 22917-2008《藍舌病診斷技術》
- SN/T 1919-2007《藍舌病競爭ELISA檢測方法》
質量保證要求包括：
- 陰陽性對照OD值需符合試劑說明書范圍
- 板內變異系數（CV）≤15%
- 重復樣本檢測結果一致性≥95%
- 實驗室需定期參加能力驗證（PT）