一、核心檢測項(xiàng)目

1. • 內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因：CruA（油菜特異性基因）、HMG（高度保守基因）等，用于驗(yàn)證DNA提取質(zhì)量及PCR有效性。
   • 目標(biāo)基因：如抗除草劑基因 CP4-EPSPS、抗蟲基因 Cry1Ab 等，檢測轉(zhuǎn)基因品系是否存在。
   • 應(yīng)用：進(jìn)出口檢疫、食品安全監(jiān)管（如歐盟法規(guī)EC 1829/2003）。
2. • SSR/SNP分子標(biāo)記：篩選油菜品種特異性標(biāo)記（如BnGMS、BnRFLP系列），用于區(qū)分雜交種與常規(guī)種。
   • DNA指紋圖譜：構(gòu)建品種標(biāo)識，防止種子市場假冒。
3. • 抗病基因：如菌核病抗性基因 BnWRKY70、根腫病抗性基因 CRa。
   • 抗逆基因：耐旱基因 BnDREB、耐鹽基因 BnSOS1，輔助育種篩選優(yōu)良性狀。
4. • 脂肪酸代謝基因：FAD2（調(diào)控油酸含量）、FAE1（控制芥酸合成），用于高油酸或低芥酸品種選育。
   • 油脂含量標(biāo)記：通過關(guān)聯(lián)分析定位高產(chǎn)油脂的QTL位點(diǎn)。
5. • 雜交種純度檢測：利用親本特異性標(biāo)記（如InDel標(biāo)記）驗(yàn)證雜交種純度（≥95%為合格）。
   • 快速鑒定技術(shù)：基于LAMP（環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增）的田間快速檢測。

二、檢測技術(shù)方法

1. • 基于SYBR Green或探針法（如TaqMan）定量目標(biāo)基因，利用內(nèi)標(biāo)基因（如CruA）校正數(shù)據(jù)。
   • 靈敏度：可檢測0.1%的轉(zhuǎn)基因成分（歐盟閾值要求）。
2. • 無需標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接絕對定量，適用于低豐度目標(biāo)基因檢測（如微量轉(zhuǎn)基因污染）。
3. • 全基因組重測序或靶向測序，用于未知轉(zhuǎn)基因事件篩查及復(fù)雜性狀基因挖掘。
4. • 定制化芯片檢測多性狀基因（如抗病、品質(zhì)、產(chǎn)量），適用于大規(guī)模育種篩選。

三、應(yīng)用場景

• 育種研究：加速優(yōu)良性狀聚合，縮短育種周期。
• 種子質(zhì)控：確保商業(yè)化種子純度與轉(zhuǎn)基因合規(guī)性。
• 食品安全：監(jiān)控食用油原料中未授權(quán)的轉(zhuǎn)基因成分。
• 國際貿(mào)易：滿足各國對油菜產(chǎn)品的差異化準(zhǔn)入要求（如中國對進(jìn)口轉(zhuǎn)基因油菜的審批制度）。

四、標(biāo)準(zhǔn)化與挑戰(zhàn)

• 國際標(biāo)準(zhǔn)：遵循ISO 21569、GB/T 19495等檢測流程。
• 難點(diǎn)：部分內(nèi)標(biāo)基因存在多拷貝或近緣種交叉反應(yīng)（如與蕪菁基因組的同源性），需優(yōu)化引物設(shè)計。
• 趨勢：CRISPR編輯品種的檢測技術(shù)開發(fā)，以及AI輔助的基因型-表型關(guān)聯(lián)分析。