1. 試驗設計要點
- 動物模型：成年健康豚鼠（通常選用白化品系，如Hartley豚鼠），雌雄各半或單一性別。
- 分組設計：
- 試驗組：受試物+弗氏完全佐劑（FCA，用于增強免疫應答）。
- 對照組：陰性對照（如生理鹽水）、陽性對照（如己基肉桂醛，用于驗證試驗有效性）。
- 劑量選擇：通過預試驗確定“最大耐受劑量”（無全身毒性但可引發刺激的濃度）。
2. 核心檢測項目
（1）誘導階段（致敏階段）
- 皮膚反應評分：
- 紅斑與水腫：按國際標準評分（如Magnusson評分法，0-3分分級）； 示例：
- 0分：無反應；
- 1分：輕度紅斑或水腫；
- 3分：重度紅斑伴融合性水腫。
- 觀察頻率：于首次注射后24、48小時記錄局部皮膚反應。
- 紅斑與水腫：按國際標準評分（如Magnusson評分法，0-3分分級）； 示例：
（2）激發階段（挑戰階段）
- 二次皮膚反應評估：
- 時間間隔：誘導后14天，于豚鼠未處理側（如對側背部）給予亞刺激劑量受試物。
- 觀察指標：激發后24、48、72小時的紅斑和水腫評分，判斷遲發型超敏反應（DTH）。
（3）致敏率計算
- 判定標準：激發階段中，試驗組動物出現≥1分反應的個體比例。
- 致敏強度分級：根據致敏率分為弱致敏（0-8%）、中度致敏（9-28%）、強致敏（29-64%）、極強致敏（≥65%）。
3. 擴展檢測項目（可選）
- 組織病理學檢查：
- 采樣：取激發部位皮膚樣本，進行HE染色。
- 觀察指標：表皮海綿樣水腫、淋巴細胞浸潤等過敏相關病理變化。
- 免疫學指標檢測：
- 血清IgE/IgG：通過ELISA法檢測抗體水平變化。
- 淋巴細胞增殖試驗：分離脾臟淋巴細胞，測定受試物刺激后的增殖能力（如MTT法）。
4. 結果分析與驗證
- 陰性/陽性對照驗證：陽性對照組應顯示顯著致敏率（如≥60%），陰性對照組應無反應。
- 統計學處理：采用卡方檢驗或Fisher精確檢驗比較組間差異，確認受試物致敏性。
5. GPMT的局限性及替代方法
- 局限性：耗時長（約3周）、動物使用量較大，可能低估某些化學物的致敏性（如金屬鹽類）。
- 替代試驗：局部淋巴結試驗（LLNA，OECD 442B），通過檢測淋巴結細胞增殖減少動物數量。
總結
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