乳酸菌飲料中脲酶的定性測定檢測方法

脲酶（Urease）是一種催化尿素分解為氨和二氧化碳的酶，廣泛存在于微生物、植物和動(dòng)物中。在乳酸菌飲料中，某些菌株可能攜帶脲酶活性，其存在可能影響產(chǎn)品穩(wěn)定性或產(chǎn)生不良風(fēng)味物質(zhì)。因此，對脲酶的定性檢測是評估產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的重要環(huán)節(jié)。

一、檢測原理

基于脲酶催化尿素水解生成氨的特性，通過酚紅指示劑（pH 6.8-8.4）的顯色反應(yīng)進(jìn)行判定。當(dāng)脲酶存在時(shí)，反應(yīng)體系中的尿素被分解產(chǎn)生堿性物質(zhì)（NH₃），導(dǎo)致溶液pH升高，酚紅由黃色變?yōu)榉奂t色或紅色。

二、實(shí)驗(yàn)材料與試劑

1. 樣品：待測乳酸菌飲料（需預(yù)處理離心取上清液）
2. 陽性對照：已知脲酶陽性菌液（如變形桿菌）
3. 陰性對照：無菌生理鹽水
4. 脲酶檢測試劑：含0.1%尿素、0.01%酚紅的磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）
5. 儀器：恒溫水浴鍋（37℃）、離心機(jī)、比色管

三、操作步驟

1. 樣品處理：取10 mL飲料樣品，4000 rpm離心10 min，取上清液備用
2. 反應(yīng)體系構(gòu)建：
??- 實(shí)驗(yàn)組：2 mL樣品上清液 + 2 mL脲酶試劑
??- 陽性對照組：2 mL陽性菌液 + 2 mL試劑
??- 陰性對照組：2 mL生理鹽水 + 2 mL試劑
3. 孵育反應(yīng)：37℃水浴靜置4小時(shí)
4. 結(jié)果觀察：比較各組顏色變化

四、結(jié)果判定

? 陽性：溶液呈粉紅色或紅色（pH≥7.4）
? 陰性：保持黃色或橙黃色（pH≤7.0）
? 可疑：出現(xiàn)輕微橙色（需延長孵育至24小時(shí)復(fù)測）

五、注意事項(xiàng)

1. 需嚴(yán)格設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)排除假陽性干擾
2. 樣品含色素可能影響判讀，建議使用離心后菌體沉淀進(jìn)行檢測
3. 某些乳酸菌可能產(chǎn)酸導(dǎo)致假陰性，需結(jié)合分子檢測（如ureC基因PCR）驗(yàn)證
4. 試劑應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，尿素溶液需過濾除菌避免微生物污染

六、臨床意義

通過本檢測可快速篩查乳酸菌飲料中是否存在產(chǎn)脲酶菌株，對控制產(chǎn)品質(zhì)量、預(yù)防因氨積累導(dǎo)致的異味產(chǎn)生及評估益生菌菌種安全性具有重要意義。陽性結(jié)果提示需進(jìn)一步進(jìn)行菌種鑒定和代謝物分析。